增强型RIPA裂解液使用说明

对于细胞：

注意：取适当量的裂解液，放与4℃预冷，使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

1.  贴壁细胞，细胞刮刮下细胞，计数，并收集5×106 个细胞，600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，用预冷的PBS重悬细胞，600g 离心5分钟收集细胞，尽量吸尽上清，加入0.5ml的预冷的裂解液，用移液器吹打数下，冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

注意：可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞，具体操作如下，

A.用移液枪小心吸去培养液，

B.加入适量的预冷的PBS,

C.用移液枪小心吸去PBS,

D.按照下表加入裂解液，冰上孵育30分钟。

E.将裂解液转入离心管中， 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

2.悬浮细胞，计数，并收集5×106 个细胞，600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，用预冷的PBS重悬细胞，600g 离心5分钟收集细胞，尽量吸尽上清，加入0.5ml的预冷的裂解液，用移液器吹打数下，冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

对于组织：

注意：取适当量的裂解液，放与4℃预冷，使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

1. 手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，洗净组织血迹，用滤纸吸干组织表面液体，将组织切成几个较小的组织块。

2. 称量组织，按组织净重(g)：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相应体积的裂解液进行匀浆 ，(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。

3. 匀浆器匀浆,肉眼观察无明显组织块，冰上孵育30分钟。

4. 10000g离心10分钟,取上清，即为蛋白提取物。

结果实例：    

   M        N                M         N                 M         N     

          DSG3                     HSP90                      PCNA

M:Hela Cells  N：A549 Cells

如图：增强型RIPA裂解液提取细胞蛋白，BCA测定蛋白浓度，上样20ug，电泳，转膜，孵育博士德一抗，应用博士德ECL发光液显色。

故障排除: