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12孔板加100－200ul确实偏多，我为了减少上样体积、增加上样量，一般是先将细胞消化下来，然后一个50ml的培养瓶细胞沉淀加100－200ul的细胞裂解液，这样提出的蛋白一般是5-10ug/ul。如果使用直接裂解法的话，12孔板应该可以只用50ul，或者更少，你可以试一下，只要裂解液能覆盖所有细胞即可，再用枪头小心吹打以促进裂解液与细胞充分接触即可。但本人认为先消化收集细胞再裂解，对于需要高浓度蛋白相对比较好。
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