Q Exactive Focus 不同高分辨定量方式在药物分析中的应用 二

2.3 样品制备

取盐酸美金刚片杂质 N-（二甲基金刚烷）甘氨酸对照品储备液，逐级稀释后制成含 N-（二甲基金刚烷）甘氨酸 0.12、 0.6、1.2、 6.0、 12.0、 60、 120、 600、 1200、 6000、 12000 ng/ml（ppb）的溶液，分别按上述不同扫描模式进样分析。

3. 结果

3.1 全扫描（FullScan）

全扫描 FullScan 定量记录的是所有进入检测器的离子信号，然后通过精确分子量提取获得目标化合物质谱响应进而实现定量。图 4 为 0.6、 1.2、 6.0 ng/ml 三个浓度全扫描下目标化合物的提取离子流信号，即使在 0.6 ng/ml 浓度下，上样量仅为 0.6 pg，全扫描仍能检测到目标化合物离子明显的信号， 1.2 ng/ml 浓度下信号强度进一步提高，且提取离子流窗口都使用了统一的5 ppm（0.0012 amu），表明 QE Focus 在极低浓度下可以保持出色的质量精度。

图 4. 全扫描 0.6 PPb、1.2 PPb、6.0 PPb 浓度下提取离子流色谱图

考察全扫描定量的线性范围和重现性。 N-（二甲基金刚烷）甘氨酸的一级全扫描精确质量数 XIC 色谱图， 1.2 ng/ml~12 µg/ml 标准曲线见图 5， 1.2 ng/ml 和 120 ng/ml 两个浓度下各 5 针精密度见图 6。

图 5. 全扫描定量线性范围（1.2 ng/ml~12 µg/ml）

图 6. 全扫描定量精密度（1.2、 120 ng/ml）

结果表明， N-（二甲基金刚烷）甘氨酸在 1.2 ng/ml~12 µg/ml 线性关系良好， Y=-138720+362674X-1.44506X2， R2=1.0000，各浓度点的偏差都在 5% 以内。在 1.2 ng/ml 定量下限和 120 ng/ml 高浓度下重现性均良好， 5 针 RSD 均小于 4%

3.2 选择离子监测（SIM）

选择离子监测 SIM 高分辨定量通过四极杆对目标化合物进行选择性通过，然后将目标化合物送入 Orbitrap 进行高分辨扫描。通过四极杆的筛选和过滤，可去除大量的干扰离子，使目标化合物更多的进入检测器，然后通过一级精确质量数的提取进行定量。比较 0.12 ng/ml SIM 模式下提取离子流信号 , 结合 AGC 值和各浓度下离子注入时间 , 可知在 0.12 ng/ml 浓度下进入 Orbitrap 检测器的目标化合物离子数目大幅增加。即使浓度比全扫描降低 10 倍，仍可获得较好的峰型。

但在定量过程中，常存在同质异素甚至同分异构体的干扰，通过一级精确质量数无法获得与目标化合物的有效区分，例如在 SIM 模式下各浓度 XIC，可观察到 6.2 min 存在干扰峰（图7 蓝色虚线框部分）。

图 7. 选择离子监测 0.6 PPb、 1.2 PPb、 6.0 PPb 浓度下提取离子流色谱图

从图 8 一级质谱数据中可以看出， 6.2 min 的峰中存在m/z238.014 的干扰离子，与目标杂质 N-（二甲基金刚烷）甘氨酸非常接近，仅相差 0.5 ppm，无法通过一级质谱对两者加以区分。

图 8. N-（二甲基金刚烷）甘氨酸和干扰峰一级质谱比对