AAV基因治疗的应用研究（二）

中国科学家在CRISPR/Cas9 与AAV的联合应用方面也不甘人后。比如，2016年3月，华东师范大学生命科学院院长刘明耀教授和李大力教授首次证明了通过Cas9基因编辑技术修复F9基因突变治疗B型血友病的可行性。刘教授的团队发现了B型血友病FIX基因的新型突变Y371D，同时找到小鼠上对应的氨基酸位点Y381D，并且利用CRISPR/Cas技术构建了C57BL/6品系的小鼠重症B型血友病模型以及蛋白质序列383位移码突变Y383STOP。然后创新性地利用AAV结合CRISPR/Cas技术在Fix基因原位进行修复，对小鼠尾静脉注射腺相关病毒来递送Cas9、sgRNA和修复模版，成功地修复了部分小鼠肝脏细胞，极大的提高了F9Y381D血友病小鼠的凝血能力和断尾实验中的生存率。文章发表在EMBO Molecular Medicine，影响因子高达9.547。

AAV突破血脑屏障

血脑屏障将脑部与外部环境隔绝开来，能够阻止有害化学物质以及细菌入侵我们的大脑，保卫大脑的安全，但同时大约95%的口服和静脉注射药物也被血脑屏障所阻挡。这就导致医生在进行帕金森等神经退行性疾病的治疗过程中，只能选择直接将药物注射到脑部，而这种侵入性方法需要在颅骨上钻孔才可以实现。在一项最新研究中，神经科学家Viviana Gradinaru利用生物工程方法获得了一种能够穿过屏障的无害病毒，即新型重组腺相关病毒AAV-PHP.B，可以将治疗药物送达脑部。这种方法和病毒必将成为突破性的研究工具，并且具有非常大的临床应用空间。

AAV与光遗传

2016年1月份，浙江大学段树民院士和汪浩研究员领导的团队揭示了小鼠对天敌气味诱导的先天性恐惧的神经环路基础。利用光遗传学，动物行为学和病毒逆向追踪等技术在小鼠大脑里发现从LHb（僵核）到LDT（背外侧被盖区）这一通路在天敌气味诱导的先天性恐惧中起到决定性的作用。LDT中的两类不同亚型的抑制性神经元（PV阳性和SOM阳性）对恐惧反应具有完全相反的双向调节功能。这些新发现为恐惧诱发的焦虑症和抑郁症的治疗提供了新的潜在靶点。该成果发表在Nature Neuroscience上，影响因子高达16分。

由以上几个最新的文章我们可以看出，AAV可以说得上是基因治疗领域当前最火热，最安全，临床应用可能最大的载体！十年磨一剑，霜刃未曾试；AAV主宰基因治疗的时代真的来了！