数据结果
为了比较Mirrorball和ABI 8200在EGFR检测灵敏度方面的差异性，将A431细胞与梯度稀释的EGFR一抗以及AlexaFluor647标记的goat anti-mouse IgG二抗共同孵育。在用Mirroball分析时，用CFSE对细胞进行染色，预先定位细胞并进行计数，细胞量为384孔板每孔2000个。对于ABI的8200， A431细胞量为每孔8000个接种。
图2表明，Mirroball检测灵敏度和ABI8200一样，从5 ng /ml抗EGFR抗体浓度开始，荧光随着浓度升高而逐渐加强。两种方法在一抗浓度高于100ng/ml的时候，都检测到了一个较强的荧光减少。这也是报道过的“钩状效应”（2）。在这里，主要是过量的一抗过饱和了，阻止了荧光二抗的结合和最终的实验读数。
图2抗EGFT抗体和 A431细胞结合的抗体浓度依赖的荧光强度曲线
Mirrorball的多激光能力提供了一个独有的优越性，对细胞的识别不会受到较低抗体结合的影响。而ABI 8200只配备了单一的640 nm激光，因此也只能检测高过背景的荧光。然而，在使用Mirrorball 时由于用CFSE（488nm）染料对细胞进行单独染色，细胞的计数就不再依赖荧光抗体的结合（图3）。可靠的细胞计数也同时增加了数据的稳健性。
图3 Mirrorball允许不依赖荧光抗体的结合量来测量CFSE标记的细胞。而在ABI 8200平台上，细胞必须有荧光抗体的结合才能被检测的到
不仅Mirrorball提供了和ABI 8200一样的高灵敏度，而且与ABI 8200只能扫描1 mm2的区域相比，它能够扫描整个孔内的细胞并且不受细胞分布的影响（图4）。由于ABI8200有限的扫描区域，往往需要较高的细胞数目来获得更具有统计学意义的结果。
图4 Mirrorball和ABI 8200扫描区域的对比
使用Mirrorball可以大幅度的减少每孔中细胞的用量，这对一些生长缓慢比较少量的细胞系特别适用，可以节省实验的消耗。
Mirrorball的软件Cellista能够像ABI 8200一样进行数据的处理并直接呈现出hit孔的位置，这个功能可以使我们兼容之前ABI 8200上的实验数据。这里EGFR实验就是个很直接的案例，不需要改变现有的protocol可以直接在Mirrorball上进行实验。
图5 使用每个微珠或细胞的平均荧光强度来代表hit
讨论
均相反应和“混合即读数一步法检测”模式特别适合生物医药研发，尤其在高通量抗体药物筛选阶段。因为这种模式能减少洗板和孵育的次数并增强检测的灵敏度，对比传统的ELISA大大缩短了实验时间，提高了实验通量。同时也要比流式细胞仪等仪器更有优势，也可以减少细胞和试剂的用量。
这里我们比较了Mirrorball和ABI 8200的检测灵敏度，实验结果表明Mirrorball的灵敏度同样优异，可以将原有在ABI 8200上进行的实验直接转移到Mirrorball上进行。
Mirrorball是第一台能够完成多重激光同时扫描的仪器，能够同时将不同荧光关联起来。当使用不同的荧光染料的时候，特别是应用在抗体筛选的实验时候，这种特性就能提供卓越的多重荧光的检测能力，包括同时检测多种抗原或者同时检测不同标记的细胞表面抗原的能力（例如，野生型和转基因细胞系）。
总体上，TTP Labtech的Mirrorball 微孔板细胞仪的“混合即读数”检测方法能够为可溶性抗原或细胞表面抗原的检测提供最稳健的数据结果。自动化的抗体筛选技术整合混合即读数的实验方式，将高灵敏度检测和高内涵抗体筛选有机结合起来，可以提高药物筛选的效率。因此，Mirrorball也是一个非常理想的ABI 8200的替代产品，将成为下一代的抗体筛选平台。
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