标签: 酵母 细胞 破碎
细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质的基础。 结合重组DNA技术和组织培养技术上的重大进展,以前认为很难获得的蛋白质现在可以大规模生产。
玻璃珠破碎法
液氮破碎法
实验材料 | 酵母菌 |
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试剂、试剂盒 | 玻璃珠破菌缓冲液 |
仪器、耗材 | 玻璃珠拍打器 |
实验步骤 | 1. 培养并收集酵母菌细胞,在酵母消解酶缓冲液重悬菌体沉淀之前,测定压紧细胞的体积,以下所有步骤均在4℃进行。
3. 用2体积的玻璃珠破菌缓沖液与细胞混合,加4体积冰冷的酸洗玻璃珠。
4a. 当压紧的细胞休积<10 ml,将细胞悬液转移至合适大小的带螺口的离心管中(悬液占离心管≤60%~70%的容积),于4℃以最大速度下振荡30~60 s,将管置于冰上放置1~2 min,重复3~5次,在显微镜下检査破细胞的程度,继续步骤5。 |