灵敏度和动态检测范围
使用GST进行灵敏度和动态检测范围测试，使用1X上样液三倍梯度稀释GST，然后加到4-20%梯度胶中跑胶30min，然后转印到Immobilon FL膜上，使用生物素标记的兔抗-GST标记2小时，之后与Eu-标记的链霉素孵育1小时，然后洗膜，晾干使用SpectraMax Paradigm多功能酶标仪进行扫描。系统表现出亚-皮克级的检测灵敏度和>4logs的动态检测范围。
Figure 2. 上图: SpectraMax Paradigm扫描的GST梯度稀释标品图像(注：伪彩标尺用来显示大的动态检测范围)；下图：为每个条带的总体荧光强度，统计显示整个动态检测范围为4logs，线性检测范围为3logs，图像分析使用Image J。
信号稳定性
铕元素-标记的一个最突出的优点之一是信号的稳定性以及对光漂白的抗性，以致western膜印记条带的稳定性可达数月之久。为了显示这一点，我们将三倍梯度稀释的转铁蛋白进行跑胶(4-20%梯度胶)30min，然后转印Immobilon FL膜上，4℃与兔抗-转铁蛋白过夜孵育，然后与铕元素-标记的抗兔IgG 4℃孵育1小时，然后洗膜，晾干，使用SpectraMax Paradigm分别于当天和一个月之后进行扫描。
• 信号经过30天也几乎没有损失
• 高度可定量结果
此外，条带可以进行多次重复扫描，信号也不会降低，将2倍梯度稀释的转铁蛋白跑胶(4-20%梯度胶)30min，然后转印Immobilon FL膜上，与兔抗-转铁蛋白孵育2小时，然后与铕元素-标记的抗兔IgG 4℃孵育1小时，然后洗膜，晾干，使用SpectraMax Paradigm进行多次扫描。
应用
• 使用Scanlater Western Blot技术检测痕量表达的内源性泛素化Rad-18蛋白(参与UV-损伤DNA修复过程)。
Figure 5. 使用不同浓度(0, 50, 100 ppm)的致癌物MMS(一种烷化剂)处理HEK293细胞，然后分别使用Scanlater TRF法和化学发光法进行检测和结果对比(Stanford University)。
• 使用ScanLater Western Blot技术检测痕量内源性的磷酸化的pChk1(参与UV & MMS-损伤DNA修复过程)。
Figure 6. 检测分别使用致癌物MMS和UV辐射处理的HEK-293细胞中磷酸化的pChk1(Stanford University)。
• 使用ScanLater Western Blot技术检测信号转导过程细胞刺激和抑制过程中产生的痕量内源性的磷酸化的JNK1蛋白；
Figure 7. 检测刺激和抑制后的自然人类肺成纤维细胞(NHFL)中的磷酸化的JNK1蛋白 (结果来自试用客户)。
总结
• 灵敏度：能够检测超低含量的人类细胞当中的内源性的磷酸化和泛素化的蛋白；
• 背景消除：铕元素时间分辨荧光标记，具有超长荧光寿命，至1ms级，使用TRF检测模式能够极大地降低自发荧光和其他来源的背景噪声；
• 节省时间：无需进行ECL般的耗时优化过程；
• 降低成本：不再需要成本高昂的X-射线胶片和显影剂；
• 即插即用：可随时在SpectraMax i3或SpectraMax Paradigm多功能酶标仪上进行高性能WB检测，极大地扩展了其在实验室研究方面的应用。
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