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改善记忆作用检验方法(二)

2020.6.22
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

1.3穿梭箱实验(双向回避实验) 
1.3.1原理:条件反射 
1.3.2仪器与试剂 
仪器:大鼠穿梭箱。该装置由实验箱和自动记录打印装置组成。实验箱大小为50cm×16cm×18cm。箱底部格栅为可以通电的不锈钢棒,箱底中央部有一高1.2cm挡板,将箱底部分隔成左右两则。实验箱顶部有淘汰和蜂鸣音控制器,自动记录打印装置可连续自动记录动物对电刺激(灯光或/和蜂鸣器)的反应和潜伏期,并将结果打印出来。
试剂:樟柳碱,环已酰亚胺,乙醇 
1.3.3实验方法 
1.3.3.1实验动物Wistar或SD大鼠,断乳鼠或成年鼠,雄、雌均可。 
1.3.3.2剂量设计和分组 同1.1.3.2 
1.3.3.3实验方法及步骤 
1.3.3.3.1受试样品对正常大鼠条件反射建立的影响 
将大鼠放入箱内任何一侧,20s后开始呈现灯光或蜂鸣音,持续20s,后10s内同时给以电刺激(100v,0.2mA,50Hz,AC)。大鼠在遭电击后即逃避,必须跑到对侧顶端,挡住光电管后才可中断电击,此为被动回避反应,在每次电击前给予条件刺激,反复强化后,大鼠在接受条件刺激后即跳向对侧并挡住光电管而逃避电击,此为主动回避反应,每隔一天训练一回,每回50次,连续训练4-5回后,动物的主动回避反应率可达80-90%以上。根据打印结果分析如下指标:动物反应次数,动物主动回避时间,动物被动回避时间,动物主动回避率。停止训练5-50天内,分2-3次测定其记忆消退情况。 
1.3.3.3.2受试样品对记忆障碍模型大鼠条件反射建立的影响 
1.3.3.3.2.1模型制造:同1.1.3.3.2.1 
1.3.3.3.2.2操作方法:同1.3.3.3.1 
1.3.4数据处理及结果判定 
动物主动回避时间和被动回避时间为计量资料,可用方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值 若实验组主动和/或被动回避时间明显短于对照组,差异有显著性,可判定为该指标阳性。 
1.3.5注意事项:同1.1.5。 

1.4水迷宫实验 
1.4.1原理 
动物都有一种“探索”和“更替”倾向,当离开一个臂时,总是跑向“久”未跑过的“新”臂。小鼠不愿在水中,因而寻找能爬出水面的阶梯,训练后,小鼠能记住找到阶梯的路线。 
1.4.2仪器与试剂 
水迷宫自动记录仪。该仪器是由迷宫游泳箱和自动记录仪两部分组成。迷宫游泳箱由聚乙烯塑料制成,长100cm、宽100cm、高30cm;内径长90cm、宽90cm、高30cm,永道宽12cm,泳道走向固定。见附图。 
1.4.3实验方法 
1.4.3.1实验动物 推荐使用纯系小鼠,断乳鼠或成年鼠,雌雄均可。 
1.4.3.2剂量设置、给样途径和期限 均同1.1.3.2 
1.4.3.3实验方法 
1.4.3.3.1受试样品对正常小鼠记忆的影响连续给样30天,末次给样次日开始训练。训练期间继续给样,每天一次。迷宫泳道水深9cm,水温约20℃(≥15℃)。将小鼠训练时间限定为120s,在120s内未到达终点的小鼠均记为120s。 
第一次训练前将小鼠放在梯子附近,使其自动爬上3次。以后每次训练前将小鼠放在梯子附近,背朝楼梯,使其自动爬上1次。实验分阶段进行,视动物学习成绩逐步加长路程。第一次训练时用一挡板在A处挡死,从A处开始训练,记录从A点到达终点的时间。第二次训练加长路程,从B处开始,此路程约训练3次,至动物数80%以上在2min内达到终点后再延长路程,分别记录各鼠每次从B点到达终点所需的时间和发生错误的次数(进入任何一个盲端一次均算一次错误)。末次测试从起点进行,将小鼠放在起点,记录从起点到达终点所需的时间和发生错误的次数。每次训练时,对2min内未到达终点的小鼠,应引导其到达终点,从终点的楼梯上来,达到训练的目的。每次训练或测验时均将头朝超始点。最后计算各组动物5次训练和测试的总错误次数,到达终点的总时间及2min内到达终点的总动物数(百分率),(包括了记忆获得和记忆巩固两个阶段的成绩)。停止训练5天后可在不同的时间从起点进行消退实验(记忆再现)。 
1.4.3.3.2受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响 
1.4.3.3.2.1模型制造方法:同1.1.3.3.2.1 
1.4.3.3.2.2操作方法:同1.4.3.3.1 
1.4.4数据处理及结果判定 
到达终点的时间属计量资料,可采方差分析,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值 错误次数和到达终点的动物数(百分率)两指标为计数资料,可用X2检验,四格表总例数小于40,或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时,应改用确切概率法。 
试验组与对照组比,试验组到达终点所用的时间或到达终点前的错误次数明显少于对照组,或2min内到达终点的动物数明显多于对照组,且经统计学检验差异有显著性。其中记忆获得、记忆巩固和记忆再现任意阶段的任一项指标为阳性,可判为该项实验阳性。 
1.4.5注意事项 
1.4.5.1训练时在目标区(终点)停留的时间不能太短,否则推动强化效果。 
1.4.5.2每天训练结束后,要对实验箱进行清洗,以清除动物留下的气味。 
1.4.5.3实验前可对动物进行初筛,经训练后,2min内仍不能游至终点者淘汰。 
1.4.5.4其余同1.1.5。 
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