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QuickAntibody免疫佐剂使用中已经遇到的问题以及答复

2020.6.29
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

使用中已经出现的问题:

1、有客户没有仔细阅读说明书,使用QuickAntibody佐剂时按照弗式佐剂方法与抗原进行乳化等操作,并在4度冰箱放置过夜,第二日取出直接免疫,结果造成效价不理想。

答复:QuickAntibody佐剂无需乳化,而且无论是佐剂本身还是与抗原混合后,长时间静置均易产生沉淀,因此均需要摇匀后才能配制和注射。

2、有客户没有仔细阅读说明书,使用QuickAntibody佐剂之前发现佐剂里面有沉淀成分,以为是污染物,离心去除,导致实验结果效价不理想。

答复:QuickAntibody佐剂产生沉淀为正常现象,只需在用前摇匀即可,若离心去除,必然影响免疫效果。

3、有客户使用QuickAntibody佐剂免疫小鼠后腿小腿肚肌肉时,误把踝关节当成膝关节,从而使免疫部位太过偏下,免疫100ul的佐剂与抗原混合液时,大量液体流出。

答复:小鼠后腿大腿一般被腹部皮肤包裹,我们正常见到的后腿肌肉部分为小腿肌肉。另外若免疫至踝关节,由于免疫部位距离发生有效免疫应答部位较远,抗原在扩散至淋巴结前容易被降解,导致免疫应答效率降低。

4、有客户使用QuickAntibody佐剂免疫小鼠,因动物较多,免疫时间较长,最后佐剂在针管中沉淀在管壁,导致前面免疫的小鼠抗体效价较高,后面免疫的小鼠抗体效价较低。

答复:QuickAntibody佐剂易产生沉淀,建议在熟练使用之前,每次抽取较少量佐剂与抗原混合物进行免疫(以二、三只小鼠用量为佳);在操作熟练后,可以适当增加免疫动物的数量(如每抽取一次免疫五只以上小鼠)。

5、有客户使用QuickAntibody佐剂制备单抗,抗原为多肽偶联载体蛋白,免疫两针后针对多肽的ELISA滴度仅为1:200,但是成功融合出4株杂交瘤细胞株,其中两株产生的单抗可以做免疫组化,完全达到他们的预期结果!

答复:我们说明书中所说的效价为蛋白抗原免疫后的效价,对于多肽和小分子来说,免疫后不可能达到如此高的滴度!原因是多肽和小分子为半抗原,本身只有一个表位或不足一个表位,而蛋白抗原有成百上千个表位。建议客户检测针对载体蛋白的ELISA滴度,如果达到说明书滴度范围,而且检测到一定水平的多肽或小分子滴度,则表明免疫成功,完全可以继续后续的融合工作。此时多肽或小分子滴度高低取决于该表位的免疫原性和偶联效率,基本与佐剂无关!然而,与蛋白抗原相比,多肽或小分子单抗的阳性克隆率则要低得多,因此客户需要筛选更多的克隆。


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