血塞通滴丸中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量的高效液相...

血塞通滴丸中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量的高效液相色谱测定

血塞通滴丸为血塞通的新剂型，其主要成分为人参皂苷Rg1，三七皂苷R1。本实验采用高效液相色谱法测定血塞通滴丸中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量。

　　1、仪器与试药

　　SSI公司PC-3000高效液相色谱仪，热电300紫外分光光度计，人参皂苷Rg1，三七皂苷R1对照品（中国药品生物制品检定所），血塞通滴丸（批号：20080409，20080401，20080402）本所自制。甲醇为色谱纯，水为纯化水。

　　2、方法与结果

　　2.1检测波长确定称取人参皂苷Rg1，三七皂苷R1对照品适量，用甲醇配制成20μg·ml-1的溶液，在200～300nm波长处扫描，结果人参皂苷Rg1，三七皂苷R1均在203nm波长处有最大吸收。

　　2.2色谱条件色谱柱为岛津KromasilC18（4.6mm×625px）；流动相为甲醇-水（58∶42）；流速为1.0ml·min-1，检测波长为203nm；理论板数按人参皂苷Rg1，三七皂苷R1峰计算不低于10000，分离度大于2.0。

　　2.3含量测定

　　2.3.1标准曲线的绘制

　　人参皂苷Rg1：精密称定人参皂苷Rg1对照品约60mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0，3.0，5.0，7.0，9.0，10.0ml分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别取10μl注入色谱仪，测定。结果表明人参皂苷Rg1在浓度0.116～1.160mg·ml-1范围内与峰面积呈良好线性关系，其回归方程Y=-99466+3257868X，r=0.9992。

　　三七皂苷R1：精密称定三七皂苷R1对照品约60mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0ml分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别取10μl注入色谱仪，测定。结果表明三七皂苷R1在浓度0.232～0.812mg·ml-1范围内与峰面积呈良好线性关系，其回归方程Y=11772+2495523X，r=0.9987。

　　2.3.2重复性与稳定性试验取标准曲线测定中心浓度点连续进样6次，量取峰面积计算RSD分别为人参皂苷Rg11.11%，三七皂苷R11.09%，重现性良好，可准确用于含量测定。该溶液放置6h后重复进样，峰面积基本不变，RSD分别为1.05%和0.99%。

　　2.3.3精密度测定取样品6份，精密称定，按样品含量测定方法测定RSD为2.5%。

　　2.3.4加样回收率测定取血塞通滴丸10粒，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声10min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取5.0ml置10ml量瓶中,精密加入人参皂苷Rg1，三七皂苷R1对照品适量,加甲醇至刻度,摇匀。按上述色谱条件分别取10μl注入色谱仪，测定。

　　2.3.5样品测定取血塞通滴丸10粒，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声10min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别取10μl注入色谱仪，测定。

　　2.3.6血塞通原料测定精密称取血塞通原料约100mg，置25ml量瓶中，加甲醇适量，超声10min使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别取10μl注入色谱仪，测定。

　　3、讨论

　　血塞通滴丸的辅料为聚乙二醇6000。经测试聚乙二醇6000的甲醇溶液无紫外吸收峰，对样品的测定无干扰。本方法简便、准确，可作为控制血塞通滴丸中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量测定方法。