用UPLC/MS/MS和UPLC/PDA 进行三聚氰胺、三聚氰酸二酰...（二）

UPLC 的条件

液相色谱系统： 沃特世 ACQUITY UPLC
色谱柱： ACQUITY UPLC BEH HILIC
2.1 x 100 mm 、 1.7 μm
柱温： 35 ℃
流速： 700 μL/ 分钟
流动相： 溶于 90/10 乙腈／水的 10 mM 醋酸铵
进样量： 5 μL
ACQUITY PDA ： 200 -300 nm

质谱条件

质谱系统： 沃特世 ACQUITY TQD
软件： 沃特世 MassLynx™ 第 4.1 版
电离模式： ESI 正离子（三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺）
ESI 负离子（三聚氰酸）
毛细管电压： 3 kV
脱溶剂气： 氮气， 900 L ／小时
锥孔气： 氮气， 50 L ／小时
源温度： 150 ˚C
脱溶剂气温度： 400 ˚C
采集： 多反应监测（ MRM ）
碰撞气： 氩气， 3.5 x 10 -3 毫巴

对每种化合物采集两种多反应监测（ MRM ）的跃迁数据。主要跃迁用于定量分析，次要跃迁用于确认。 MRM 的跃迁、停顿时间、优化后的碰撞能量以及锥孔电压见表 1 。

表 1. 受监测的 MS/MS 离子跃迁（ ESI 正离子），三聚氰胺、三聚氰酸二酰胺；（ ESI 负离子）三聚氰酸

第 1 部分： UPLC /MS/MS 分析

ACQUITY UPLC-TQD 台顶式串联四极杆质谱仪可用不到 1.5 分钟的时间完成对三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的分离和确认。参见图 3 。 ACQUITY UPLC BEH HILIC 色谱柱可给出清晰的峰形，从而可对宠物食品和面筋型样品进行可信的定量分析。为实现准确定量，组织样品的分析通常需要使用一种同位素标记型内标。本文未对组织样品的分析进行说明，这是因为目前没有适用于这些化合物的同位素标记型内标。

三聚氰酸在另一次检测中进行分析，所用的色谱条件与三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺的分析条件相同。图 4 给出了氰尿酸的一幅 UPLC/MS/MS 色谱图。

图 5 给出了萃取得到的一种三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺加标型干狗粮样品。沃特世 TargetLynx™ 应用管理软件可自动处理数据并报告定量分析结果；该软件通过计算每种化合物的主要和次要 MRM 跃迁之间的离子比，可确定是否存在三聚氰胺和三聚氰酸二酰胺。图 6 给出了关于三聚氰酸二酰胺的 TargetLynx 浏览器界面。