关键词：
超高效液相色谱 奶粉 牛奶 Fructose( 果糖 )Sorbose （山梨糖 )
Glucose( 葡萄糖 )Sucro se( 蔗糖 )Malto se( 麦芽糖 )Lacto se( 乳糖 )
Maltotriose( 麦芽三糖 ) Maltotetraose( 麦芽四糖 )
实验方法
材料、试剂和仪器
乙腈为色谱纯，三乙胺为优级纯，实验用水为超纯水
(18MΩ,TOC3ppb) ， ACQUITY UPLC 超高效液相色谱系统，Acquity ®
ELSD 检测器 ,(FILTER MIXER (425μl,P/N 205000403), 可不用 ) 。
色谱条件
液相系统：Waters ACQUITY UPLC ®
配 ACQUITY ELSD 蒸发光散射检测器
色谱柱： AACQUITY UPLC BEH Amide 2.1mm x 100mm ，1.7 μm, P/N:1860 04801
柱温：35˚C
分析时间：18min
进样量： 5ul( 样品进样 2ul)
流动相： A: 水 B:0.2%TEA 乙腈溶液 ; 梯度 洗脱
弱洗溶剂： 乙腈 / 水 =90 /10 ， 8 00µl
强洗溶剂： 乙腈 / 水 =10/9 0 ， 500 µl
进样方式： 不充满定量环（使用针溢出）
ELSD 条件：
增益： 5 00
数据率： 10pp s
喷雾器模式： 冷却
漂移管温度： 55˚C
气体压力： 30 psi
实验室试验温度： 20˚ C
实验室试验湿度： 45%
工作电源： 220V 稳定电源
梯度方法见下表：
数据处理系统
Empower 2
前处理方法
称取 2. 0 g 奶粉样品或 5ml 液态奶样品，加入20mL( 对于液态奶添加 15ml)1/1 的乙腈水溶液溶解，手摇震荡混匀，然后涡旋混匀 2 分钟，室温下 8000 r/min 离心 15 分钟，取上清液过0 .2µm滤膜；对于某些样品由于糖含量很高，所以过滤后的样品可能需要用乙腈 / 水 =7 0/3 0 的溶液稀释一定倍数后，进样检测。
结果与讨论
标准配制
八种糖标准分别称取 10 mg ，用 1/1 的乙腈水定容至 1ml ，然后用乙腈 / 水 =70/3 0 的溶液稀释配制各个浓度的标准品，进行实验。
八种糖 UPLC 分离检测色谱图及数据
图 1. 八种糖 UPLC 分离检测色谱图
图 1 是八种糖 50ppm 混合标准品用 UPLC(ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱) 分离， E LSD 检测的色谱图，按照保留时间顺序分别是： Fructo se( 果糖 ) 、 Sorbose( 山梨糖 ) 、 Glucose( 葡萄糖 ) 、 Sucrose( 蔗糖 ) 、 Malto se( 麦芽糖 ) 、 Lacto se( 乳糖 ) 、 Maltotriose( 麦芽三糖 ) 、 Maltotetraose( 麦芽四糖 ) ；包括 5 种单糖和 3 种多糖。有关数据见下表。
表 2. 八种糖 标准品分离分析数据
其中较难分离的 Fructose( 果糖 ) 和 So rbose( 山梨糖 ) 、 Maltose( 麦芽糖 ) 和 Lacto se( 乳糖 ) 均分别达到 1.6 、 1.5 的分离度。
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