Ying Qing Yu 与 Martin Gilar / 美国马萨诸塞州米尔福德沃特世公司
简介
本应用纪要中，我们介绍了沃特世ZL RapiGest™ SF 试剂的物理化学性质及其应用领域。 2002 年，我们首次推出 RapiGest SF ，这一创新产品是帮助酶消解的有利工具，可促进溶液中蛋白的消解，它能够改善样品制备过程中蛋白的溶解度。
RapiGest SF 提高酶解速率与完全程度的机理详见图 1 。温和的蛋白变性可打开蛋白结构并暴露酶切位点，以供酶切。在 RapiGest SF 溶液中，酶对变性的耐受性优于普通蛋白，并能保持活性。在加入酶之前高温加热 RapiGest SF 溶液可使球蛋白更为完全变性，之后需将酶与样品一起进行 37 °C 的孵育。 1,2
超过 200 多家行业内杂志引用了使用 RapiGest SF 进行样品溶解的案例，大部分为蛋白组学的应用。最近，许多制药实验室使用 RapiGest SF 用于蛋白药物的确证。因为酶消化的速度的提高并在 LC 、 MS 分析前极易清除， RapiGest SF 已被多个应用领域广泛接受，其中包括高级序列研究的 LC/UV/MS 蛋白药物的肽图分析。
讨论
什么是 RapiGest SF?
RapiGest SF 是酸性不稳定表面活性剂，在酸性条件下极易水解。 1 这种独特的性质，在需要的时候，可用于从溶液中清除表面活性剂。 RapiGest SF 的结构及其水解副产物见图 2 。酸性不稳定的性质可在 pH2 条件下， 45 分钟内达到完全降解。 1
该表面活性剂可降解为两个产物： dodeca-2-one 和 3- （ 2,3- 二羟基丙基）丙磺酸钠。前者与水不能互溶，可通过离心清除。后者在水溶液中溶解度很高，而在反相 LC 模式下不保留。酶消解后的水溶液可直接进行 HPLC 、 LC/MS 或 MALDI-TOF MS 进行分析。
消解后的清除
样品分析前无需额外去清除表面活性剂（如透析）。在分析前，酶消解后通常经过酸（如甲酸、三氟乙酸（ TFA ）或盐酸（ HCl ））的酸化，降解 RapiGest SF 。建议降解条件 pH ≤ 2 。
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