四)碘盐自形成梯度:( Nycodenz或 metrizamide)
这二种梯度材料在固定角式转头或垂直管转头,近垂直转头离心过程中会用较短的时间就可以自形成密度。
和重金属盐一样,离心力、转头种类、离心时间对自形成梯度的形状都有很大的影响。
由于碘盐的粘性系数对温度很敏感,很小的温升也会因粘性降低而加速自形成梯度的形成。
碘盐的扩散速度比重金属盐要快一些,为了修正梯度曲线,一般在离心管底部铺较高密度材料(参考文献 2)
可惜,碘盐的自形成梯度离心没有进行数学计算式的研究,但是大量的实验文献提供了足够的经验,使我们根据需分离样品的特点选择最佳的梯度形状(文献 2,以及 Rickwood.D.有关这方面一系列的文章)
各种生物体组分在碘盐中的浮密度
细胞核 | 线粒体 | 溶酶体 | 过氧化酶体 | 质膜 | 天然 DNA | 降解 DNA | |
Nycodenz | 1.23 | 1.17 | 1.15 | 1.22 | 1.11~1.19 | 1.13 | 1.17 |
metrizamide | 1.22 | 1.16 | 1.13 | 1.22 | 1.14~1.26 | 1.12 | 1.14 |
RNA | 蛋白质 | 染色体 | 过氧化物酶 | mRNA | |
Nycodenz | 1.18 | 1.27 | 1.18 | 1.32 | 1.2 |
metrizamide | 1.17 | 1.26 | 1.19 | 1.32 | 1.2 |
表(1)用 NaCl稀释的 Nycodenz等渗液性质
浓度计算%W/V=628.7×RI(折射率)-839
密度计算 g/ml=3.348×RI-3.466
浓度 | RI | 密度 g/ml | 浓度 | RI | 密度 g/ml | ||
百分比浓度%(W/V) | Molar | 百分比浓度%(W/V) | Molar | ||||
0.0 | 0.0000 | 1.3361 | 1.0030 | 14.0 | 0.1705 | 1.3568 | 1.0776 |
1.0 | 0.0122 | 1.3377 | 1.0083 | 15.0 | 0.1827 | 1.3584 | 1.0829 |
2.0 | 0.0244 | 1.3393 | 1.0137 | 16.0 | 0.1949 | 1.3599 | 1.0882 |
3.0 | 0.0365 | 1.3409 | 1.0190 | 17.0 | 0.2071 | 1.3615 | 1.0935 |
4.0 | 0.0487 | 1.3425 | 1.0243 | 18.0 | 0.2192 | 1.3631 | 1.0989 |
5.0 | 0.0609 | 1.3440 | 1.0296 | 19.0 | 0.2314 | 1.3647 | 1.1042 |
6.0 | 0.0731 | 1.3456 | 1.0350 | 20.0 | 0.2436 | 1.3663 | 1.1095 |
7.0 | 0.0853 | 1.3472 | 1.0403 | 21.0 | 0.2558 | 1.3679 | 1.1148 |
8.0 | 0.0974 | 1.3488 | 1.0456 | 22.0 | 0.2680 | 1.3695 | 1.1202 |
9.0 | 0.1096 | 1.3504 | 1.0509 | 23.0 | 0.2801 | 1.3711 | 1.1255 |
10.0 | 0.1218 | 1.3504 | 1.0563 | 24.0 | 0.2923 | 1.3727 | 1.1308 |
11.0 | 0.1340 | 1.3520 | 1.0616 | 25.0 | 0.3045 | 1.3743 | 1.1362 |
12.0 | 0.1462 | 1.3536 | 1.0669 | 26.0 | 0.3167 | 1.3759 | 1.1415 |
13.0 | 0.1583 | 1.3552 | 1.0722 | 27.0 | 0.3289 | 1.3774 | 1.1468 |
表(2)用葡萄糖稀释的 Nycodenz等渗液性质
浓度计算%W/V=823.9×RI-1108
密度计算 g/ml=4.060×RI-4.446
浓度 | RI | 密度 g/ml | 浓度 | RI | 密度 g/ml | ||
百分比浓度%(W/V) | Molar | 百分比浓度%(W/V) | Molar | ||||
0.0 | 0.0000 | 1.3449 | 1.0140 | 14.0 | 0.1705 | 1.3619 | 1.0830 |
1.0 | 0.0122 | 1.3461 | 1.0189 | 15.0 | 0.1827 | 1.3631 | 1.0879 |
2.0 | 0.0244 | 1.3473 | 1.0239 | 16.0 | 0.1949 | 1.3643 | 1.0928 |
3.0 | 0.0365 | 1.3485 | 1.0288 | 17.0 | 0.2071 | 1.3655 | 1.0978 |
4.0 | 0.0487 | 1.3498 | 1.0337 | 18.0 | 0.2192 | 1.3667 | 1.1027 |
5.0 | 0.0609 | 1.3510 | 1.0386 | 19.0 | 0.2314 | 1.3680 | 1.1076 |
6.0 | 0.0731 | 1.3522 | 1.0436 | 20.0 | 0.2436 | 1.3692 | 1.1126 |
7.0 | 0.0853 | 1.3534 | 1.0485 | 21.0 | 0.2558 | 1.3704 | 1.1175 |
8.0 | 0.0974 | 1.3546 | 1.0534 | 22.0 | 0.2680 | 1.3716 | 1.1224 |
9.0 | 0.1096 | 1.3558 | 1.0583 | 23.0 | 0.2801 | 1.3728 | 1.1273 |
10.0 | 0.1218 | 1.3570 | 1.0633 | 24.0 | 0.2923 | 1.3740 | 1.1323 |
11.0 | 0.1340 | 1.3583 | 1.0682 | 25.0 | 0.3045 | 1.3752 | 1.1372 |
12.0 | 0.1462 | 1.3595 | 1.0731 | 26.0 | 0.3167 | 1.3765 | 1.1421 |
13.0 | 0.1583 | 1.3607 | 1.0781 | 27.0 | 0.3289 | 1.3777 | 1.1470 |