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用 CsCl,Percoll, Nycodenz, metrizamide作自形成密度梯度离心 二

2020.7.14
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

四)碘盐自形成梯度:( Nycodenz或 metrizamide)
这二种梯度材料在固定角式转头或垂直管转头,近垂直转头离心过程中会用较短的时间就可以自形成密度。
和重金属盐一样,离心力、转头种类、离心时间对自形成梯度的形状都有很大的影响。
由于碘盐的粘性系数对温度很敏感,很小的温升也会因粘性降低而加速自形成梯度的形成。
碘盐的扩散速度比重金属盐要快一些,为了修正梯度曲线,一般在离心管底部铺较高密度材料(参考文献 2)
可惜,碘盐的自形成梯度离心没有进行数学计算式的研究,但是大量的实验文献提供了足够的经验,使我们根据需分离样品的特点选择最佳的梯度形状(文献 2,以及 Rickwood.D.有关这方面一系列的文章)
各种生物体组分在碘盐中的浮密度


细胞核

线粒体

溶酶体

过氧化酶体

质膜

天然 DNA

降解 DNA

Nycodenz

1.23

1.17

1.15

1.22

1.11~1.19

1.13

1.17

metrizamide

1.22

1.16

1.13

1.22

1.14~1.26

1.12

1.14



RNA

蛋白质

染色体

过氧化物酶

mRNA

Nycodenz

1.18

1.27

1.18

1.32

1.2

metrizamide

1.17

1.26

1.19

1.32

1.2

表(1)用 NaCl稀释的 Nycodenz等渗液性质
           浓度计算%W/V=628.7×RI(折射率)-839
           密度计算 g/ml=3.348×RI-3.466

浓度

RI

密度 g/ml

浓度

RI

密度 g/ml



百分比浓度%(W/V)

Molar

百分比浓度%(W/V)

Molar





0.0

0.0000

1.3361

1.0030

14.0

0.1705

1.3568

1.0776

1.0

0.0122

1.3377

1.0083

15.0

0.1827

1.3584

1.0829

2.0

0.0244

1.3393

1.0137

16.0

0.1949

1.3599

1.0882

3.0

0.0365

1.3409

1.0190

17.0

0.2071

1.3615

1.0935

4.0

0.0487

1.3425

1.0243

18.0

0.2192

1.3631

1.0989

5.0

0.0609

1.3440

1.0296

19.0

0.2314

1.3647

1.1042

6.0

0.0731

1.3456

1.0350

20.0

0.2436

1.3663

1.1095

7.0

0.0853

1.3472

1.0403

21.0

0.2558

1.3679

1.1148

8.0

0.0974

1.3488

1.0456

22.0

0.2680

1.3695

1.1202

9.0

0.1096

1.3504

1.0509

23.0

0.2801

1.3711

1.1255

10.0

0.1218

1.3504

1.0563

24.0

0.2923

1.3727

1.1308

11.0

0.1340

1.3520

1.0616

25.0

0.3045

1.3743

1.1362

12.0

0.1462

1.3536

1.0669

26.0

0.3167

1.3759

1.1415

13.0

0.1583

1.3552

1.0722

27.0

0.3289

1.3774

1.1468

表(2)用葡萄糖稀释的 Nycodenz等渗液性质
           浓度计算%W/V=823.9×RI-1108
           密度计算 g/ml=4.060×RI-4.446

浓度

RI

密度 g/ml

浓度

RI

密度 g/ml



百分比浓度%(W/V)

Molar

百分比浓度%(W/V)

Molar





0.0

0.0000

1.3449

1.0140

14.0

0.1705

1.3619

1.0830

1.0

0.0122

1.3461

1.0189

15.0

0.1827

1.3631

1.0879

2.0

0.0244

1.3473

1.0239

16.0

0.1949

1.3643

1.0928

3.0

0.0365

1.3485

1.0288

17.0

0.2071

1.3655

1.0978

4.0

0.0487

1.3498

1.0337

18.0

0.2192

1.3667

1.1027

5.0

0.0609

1.3510

1.0386

19.0

0.2314

1.3680

1.1076

6.0

0.0731

1.3522

1.0436

20.0

0.2436

1.3692

1.1126

7.0

0.0853

1.3534

1.0485

21.0

0.2558

1.3704

1.1175

8.0

0.0974

1.3546

1.0534

22.0

0.2680

1.3716

1.1224

9.0

0.1096

1.3558

1.0583

23.0

0.2801

1.3728

1.1273

10.0

0.1218

1.3570

1.0633

24.0

0.2923

1.3740

1.1323

11.0

0.1340

1.3583

1.0682

25.0

0.3045

1.3752

1.1372

12.0

0.1462

1.3595

1.0731

26.0

0.3167

1.3765

1.1421

13.0

0.1583

1.3607

1.0781

27.0

0.3289

1.3777

1.1470


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