在转印过程中将产生大量热量，因此对电场强度要有一定的限制。转印中产生的焦耳热（Joule）与电源参数P成正比，P=I*V=I2R。电泳转印缓冲液的温度随着焦耳热的增加而升高，此时其电阻却明显下降。电阻的降低将会使转印过程和电场强度发生变化，从而影响电转印缓冲液的缓冲能力。同时，系统过热还会引起凝胶的损坏或与印迹膜发生粘连。从而槽体的散热能力将直接影响电泳转印效率。
本室主要以湿转进行转印，因此本文就湿转为例，对化学发光和ChemiDoc XRS的应用进行叙述。
一、转膜（湿转）：
（1）转一张膜需准备2张6.5*10cm的滤纸和1张5.5*8.5cm的PVDF膜。切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。将切好的PVDF膜浸于甲醇中不少于15分钟才可使用。
（2）在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、两张滤纸和浸过的PVDF膜。
（3）打开夹子将黑的一面放入转膜液中，从下往上依次放入海绵、滤纸、分离胶、PVDF膜、滤纸、海绵。
注意:1整个过程在转膜液中进行在铺每一层时要用刮子赶气泡，尤其是胶与膜之间一定不能留有气泡。
2撬玻璃板剥胶时动作要轻，用刮子将浓缩胶轻轻刮去小心剥下分离胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐
（4）将夹子合好，放到转移槽槽中，要使夹的黑面对槽的黑面，夹的白面对槽的红面。接通电电转移时会产热，在槽的一边有较大空隙，放入事先准备好的冰盒来降温。将整个电泳槽放入一个大的容器中（大的塑料泡沫盒子最好），在这个容器中盛满冰。
（5） 250毫安恒流转膜2小时。
（6）2小时后，将膜取出，用TBST洗膜5分钟。
（7）用5%脱脂奶粉室温封闭。
封闭是为了使抗体仅仅只能跟特异的蛋白质结合而不是和膜结合。
脱脂奶粉要用TBST配置，要在干净的容器里进行封闭，且足以覆盖住膜。
二、孵育一抗
一抗用BSA溶解，根据抗体说明书上的要求稀释抗体（大部分稀释度为1：1000），4℃过夜。 也可根据抗体量和膜上抗原量适当延长或缩短时间。
（有些一抗室温孵育一小时也可得到满意的结果）
三、孵育二抗
室温孵育1小时。 一般采用HRP标记的二抗，稀释比例为1:2000。
二抗的稀释比例不能太低，否则容易导致非特异性的结合。
注意：孵育二抗之前一定要用 TBST将膜洗三次，每次五分钟，时间一定要够。
洗涤是为了洗去二抗的非特异性结合，洗涤的效果直接影响结果背景的深浅，所以洗涤一定要干净。
四、曝光
本实验室选用威格拉斯 “western 发光检测试剂盒”，如采用Bio-Rad公司的Immun-Star WesternC化学发光试剂盒（已针对CCD成像做了优化），可获得更好的效果。
（1）洗膜，2至3次，每次5分钟
（2）在照胶仪放膜的平板上加少许水，取一张与平板大小合适的保鲜膜铺在平板上，排气泡。
作用：a 保证PVDF膜能在一个相对干净的平台上曝光，避免污染。
b 铺上保鲜膜后，背景颜色是纯黑色且深浅均匀，这样当半透明的PVDF膜在白测光下照Marker时，会更清晰、明显。
（3）将膜放入照胶仪，调整明暗、大小、焦距，在目的条带的marker出，用圆珠笔标一个印记。
（4）选择EPI WHITE 光，点击“White Epi IIIumination”点击 Auto Expose 获取marker图片，图片最大化，选中图片，选择file ->export to jpeg，quantity调至最大值100，保存至文件夹。保存为jpeg格式后，转至其他电脑即使未安装quantity one 软件也可用其他图像软件编辑图片。
（5）将发光液A液和B液按1：1比例混匀、倒在PVDF膜上，发光液能盖住膜即可，关闭WHITE
EPI光（注意膜的位置从照Marker开始，不要改变）点击“Chem Hi Sensitivity”，点击“Live
Acquire”选择合适的曝光时间，张数，选择指定文件夹，保存。
选择比较满意的图片，按如上所说转换至jpeg格式。
例如，Caveolin-3、AKT、ERK、GSK等比较好曝的，可以调至10s一张，一般10张之内就可得到好的效果。其他不太容易出条带的，可以适当延长时间。
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