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RPA重组酶是什么?

2020.8.06
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chenghanfei

致力于为分析测试行业奉献终身

  2006 年,Piepenburg 等首次提出了重组酶聚合酶扩增反应(recombinase polymerase amplification,RPA)。它是由重组酶(T4 uvsX)、聚合酶(Bsu)和单链结合蛋白(gp32)以及两条特异性的上下游引物参与的等温扩增。

  首先, T4 uvsX 在辅助因子 uvsY 的作用下与引物结合形成核酸蛋白复合物,然后该复合物寻找与靶标 DNA 的互补区域进行杂交并置换下另一条单链,置换下的单链马上被 gp32 结合防止其再与互补链杂交,最后 T4 uvsX 在 ATP 的作用下与引物解离,聚合酶 Bsu 与引物结合并沿模板进行延伸(图 1)。

  该反应在 37~42℃下 30 min 内可以获得 1012 拷贝的扩增产物,其灵敏度可达到单拷贝,其扩增产物长度在 500 bp 以内最佳。对 RPA 产物的 检测可采用包括琼脂糖凝胶电泳、荧光探针实时检测、及侧流层析检测等多种方法。由于 RPA反应快速、灵敏以及恒温条件温和等特点,因此易于与微流控芯片结合开发出对病原微生物的即时检测(point-of-care testing, POCT)技术 。

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  图 1 重组酶聚合酶扩增反应基本原理;1:在重组酶作用下,引物与靶序列结合;2:引物与靶序列结合后置换下的单链被单链结合蛋白结合;3:在聚合酶作用下进行延伸, 同时置换下的单链被单链结合蛋白结合;4:同源双链分离,持续延伸;5:形成新的双链,并进行下一个循环。


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