实验材料 DNA

试剂、试剂盒 SSCNaClNaOHTris·Cl

仪器、耗材 紫外透射仪电泳仪多样抽滤加样器

实验步骤

1.  裁一张与多样过滤加样器一样大小的尼龙膜，将膜置于6×SSC的表面让其自然浸没。放置10 min。

2.  裁一张与多样过滤加样器一样大小的Whatman 3 MM 滤纸，用6×SSC浸湿。

3.  将Whatman 3 MM 滤纸置于多样抽滤加样器上，将膜放置于其上。将多样抽滤加样器按厂商说明书安装好，确保装置中不漏气。

4.  在DNA中加入20×SSC使其终浓度为6×SSC，体积为200~400 μl，在100℃变性10 min，然后置于冰中。

5.  连接吸液装置与多样抽滤加样器，每孔中加入500 μl 6×SSC。

6.  将DNA样品离心5 s，将样品加于各孔中，小心勿让吸头触及膜，让样品滤过。

7.  拆开多样过滤加样器装置，将膜置于一张浸过变性液的Whatman 3 MM 滤纸上，放置10 min。

8.  将膜转至一张浸过中和液的的Whatman 3 MM 滤纸上。放置5 min。

9.  将膜置于一张Whatman 3 MM 滤纸上，晾干。

10.  将尼龙膜置于可透过紫外线的塑料夹层中，将有DNA的一面朝下置于紫外透射仪上照射适当的时间以固定DNA。

11.  将晾干的膜夹于Whatman 3 MM 滤纸之间，室温下可保存数月。