实验材料 IL-4诱生

试剂、试剂盒 生理盐水淋巴细胞分层液FCS-IMDM培养液PHA

仪器、耗材 细胞培养板培养箱

实验步骤

一、IL-4生物学活性测定

CT.4S细胞悬液制备①

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接种细胞于96孔培养板②

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加待测样品和标准品③

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加3H-TdR④

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收集细胞，测定3H-TdR掺入量⑤

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绘制标准曲线，计算待测样品的IL-4的活性单位⑥

注意事项

①用0.25%胰酶消化、收集生长旺盛的贴壁CT.4S细胞；经Hank’s液离心洗涤2次后，10%FCS-RPMI-1640培养液调制细胞浓度为1×105/ml。

②接种细胞于96孔细胞培养板，每孔0.1 ml。

③加入适当稀释的待测样品和标准品，每孔0.1 ml。每个样品设3个复孔，同时设培养液对照。37度，5%CO2孵育48小时。

④与⑤同IL-2。

⑥以cpm为纵坐标，对应的不同稀释浓度IL-4标准品浓度为横坐标，在半对数图纸上绘制出标准曲线，再从标准曲线上查出待测样品中的IL-4含量。

关键点在IL-4诱生过程中，常同时产生一定量的IL-2，将影响IL-4的检测结果。因此，最好采用IL-2mAb吸附剂除去IL-2。