植物体内多酚氧化酶活性的测定实验

实验方法原理 多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在有氧的条件下，能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度，即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下：.

实验材料 马铃薯块茎

试剂、试剂盒 聚乙烯吡咯烷酮磷酸缓冲液磷酸缓冲液和度硫酸铵儿茶酚三氯乙酸

仪器、耗材 UV－1206UV－1240分光光度计离心机恒温水浴研钵或匀浆机试管移液管纱布袋

实验步骤

1. 粗酶液的制备

称取马铃薯块茎5g于研钵中，加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮（事先用蒸馏水浸洗，然后过滤以除去杂质）和100 ml 0.1mol·L－1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆，用几层纱布袋过滤，滤液加入30%饱和度硫酸铵，离心除沉淀，上清液再加硫酸铵使达60％饱和度，离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2～3 ml 0.01mol·L－1 pH6.5磷酸缓冲液中，即为粗制酶液。

2. 活性酶的测定

在试管中加入3.9 ml 0.05 mol·L－1 pH5.5磷酸缓冲液，1.0 ml 0.1 mol·L－1儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min ，然后加入0.5 ml酶液（可视酶活性增减用量），迅速摇匀，倒入比色杯内，于525nm波长处以时间扫描方式，在1～2min内测定吸光度变化（A）值。