免疫荧光的标本要如何制作？

荧光显微技术主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位。因此标本制作的好坏直接影响到检测的结果。在制作标本过程中应力求保持抗原的完整性，并在染色、洗涤和封埋过程中不发生溶解和变性，也不扩散至临近细胞或组织间隙中去。标本切片要求尽量薄些，以利抗原抗体接触和镜检。标本中干扰抗原抗体反应的物质要充分洗去，有传染性的标本要注意安全。

常见的标本主要有组织、细胞和细菌三大类。按不同标本可制作涂片、印片或切片。组织材料可制备成石蜡切片或冷冻切片。石蜡切片因操作烦琐，结果不稳定，非特异反应强等已少应用。上海恒远搜集整理组织标本也可制成印片，方法是用洗净的玻片轻压组织切面，使玻片粘上1～2层组织细胞。细胞或细菌可制成涂片，涂片应薄而均匀。涂片或印片制成后应迅速吹干、封装。置－10℃保存或立即使用。

免疫荧光的标本制作的基本程序和DAB显色的组化类似：

      1 免疫荧光不需要使用双氧水处理，封闭和一抗孵育与其它相同

      2 免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育，孵育时间根据抗体的工作浓度确定

      3 二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察

      4免疫荧光在封片使用专用封片剂（如果你经费比较充足）或甘油：0.01MPBS （7：3）

      5 封片后的标本4度冰箱保存，照像后可以在－70度的冰箱保存备用

      6 条件许可可以购买防淬灭的试剂加入封片剂中，标本可以保存更久

      7 荧光抗体的孵育以及后续处理需要闭光

      8 荧光抗体染色假阳性可能会多，需要设定阳性和阴性对照