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生化实验的基本操作和常用仪器使用-3

2020.9.07
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

1、72型分光光度:72型分光光度计是可见光分光光度计,其波长范围为420—720毫微米。
(1)操作方法:
① 按照接线要求,将稳压器和检流计连接在单色器上。注意,将检流计与单色器相接时,应按三股接线的颜色准确连接。而稳压器的输出接线柱与单色器相接。
② 在电源电压与仪器要求的电压相符时,分别插上稳压器和检流计的电源插头。
③ 将单色器的光路闸门找到黑点(关闭光路的指示)位置后,再将检流计上的电源开关旋到“开”处。此时,指示光点即出现在标尺上,用零点调节器将光点中线准确地调至透光率标尺的。“0”位上。
④ 打开稳压器的电源开关和单色器的光源开关,隔10分钟,再使用仪器。
⑤ 将比色杯架暗厢盖打开,取出比色杯架,将4支比色杯中的1支装入空白溶液或蒸馏水,其余3支装入待测液。将比色杯置于架上,空白溶液杯应放在第一格内,放回暗厢内,盖好暗厢盖。此时,空白溶液杯应在光路上。
⑥ 旋转波长调节器,将所需波长对准红线。把光路闸门拨到红点(打开光路的指示)位置上,并以顺时针方向旋动光点调节器,使光点中线移至透光率“100”的刻度处。数分钟后,待光电池趋于稳定,再轻轻转动光点调节器,使光点中线准确地处于透光率“100”的位置。

⑦ 将单色器的光路闸门拨回黑点处,校正检流计的光点中线于“0”位上。然后,立即开启光路闸门,拨至红点处,校正检流计光点中线对准透光率“100”刻度上。
⑧ 调节好后,可以进行样品溶液的测定。将比色杯定位装置的拉杆轻轻地拉出一格,使第二个比色杯内的待测液进人光路。此时,检流计标尺上光点中心线所指示的读教,即为该溶液的光密度或透光率。依此测定第二、第三个待测液,并读出数据。重复2—3次后,取其平均值。
⑨ 在测定过程中,应经常关闭光路闸门,核对检流计的零点位置。如有改变,及时用零点调节器核准。
⑩ 测定完毕,将每个旋钮、开关和调节器等复原或关闭。拔掉电源插头,切断电源,并盖好仪器罩。
(2)注意事项:
① 仪器连续使用时间不应超过2小时,每次使用后需要间歇半小时以上才能再用。
② 测定某未知待测液时,先制作该溶液的吸收光谱曲线,再选择最大吸收峰的波长作为测定的波长。每次读教后将空白杯推入光路,检流计光点中线仍位于透光率 “100”,则读数有效。
③ 其他注意事项与光电比色计相同。
2、751型分光光度计:751型分光光度计是可见光和紫外光分光光度计,其波长范围为200—1000毫微米。
(1)操作方法:
① 在电源电压与仪器要求的电压相符时,插上电源插头。
② 仪器装有两个光源灯。钨灯的波长范围为320—1000毫微米,氢灯为320毫微米以下。拨动光源灯座的把手,将选用的光源灯置于光路中。根据需要可以在光路中插入滤光片,以减少杂散光,一般情况下无此必要。
③ 检查仪器各种开关和旋钮,处于关闭位置时,打开电源开关,预热20分钟。
④ 选择适当的比色杯,测定波长在350毫微米以上时,用玻璃比色杯;若在350毫微米以下,必须使用石英比色杯。比色杯盛入溶液后,放在比色杯架上,然后再放人暗厢内,盖好盖板。此时,空白溶液或蒸馏水的比色杯恰好处于光路中。
⑤ 选择适当的光电管。测定的波长范围在200—626毫微米内,用蓝敏光电管,应将手柄推入:若在625—1000毫微米范围以内,用红敏光电管,应将手柄拉出。
⑥ 将选择开关扳至“校正”位置后,转动选择波长的旋钮,使波长刻度对准所需要的波长。
⑦ 调节暗电流旋钮,使电表指针对准“0”位置。为了得到较高的准确度.每测量一次都应校正暗电流一次。
⑧ 调节灵敏度旋钮,在正常情况下,从关闭的位置起沿顺时针方向转动3—5圈。
⑨ 转动读数电位器旋钮,使刻度盘处于透光率100%位置。然后,把选择开关扳至“ ×1”位置。再拉开暗电流闸门,使单色光进人光电管。
⑩ 调节狭缝旋钮,使电表指针处于“0”位置附近,再用灵敏度旋钮仔细调节,使电表指针准确地位于“0”’处。

⑾ 完成上述操作后将比色杯定位装置的手柄轻轻地拉出一格,使第二个比色杯的待测液处于光路中。注意,应使滑动板准确地位于定位槽内。这时电表指针偏离“0” 位。再转动读数电位器旋钮,重新使电表指针对准“0”位,刻度盘上的读数即为该待测液的光密度或透光率。依此测定第二、第三个待测液,并读出数据。
⑿ 完成一次测量后,立即关上暗电流闸门,以保护光电管。
⒀ 在读数时,若选择开关处于“×1”位置,光密度(即消光)范围为0—∞,透光率是O-100%。当透光率小于10%时,则可把选择开关扳至“× 0.1”位置。这时,读出的透光率数值,应除以“10”;而读出的光密度值,则应加上“1.0”。
⒁ 测定完毕,将每个开关、旋钮、操作手柄等复原或关闭。拔掉电源插头,以切断电源,并盖好仪器罩。
(2)注意事项;
① 该仪器为贵重的精密仪器,应由专人负责管理和维护。
② 若外电路电压波动较大,可使用稳压器,以增加仪器的稳定性。
③ 其它注意事项与72型分光光度计相同


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