一、原理
本法是由Geoghegan等（1978）首次应用金标探针检测B淋巴细胞表面抗原，将胶体金颗粒（大于20nm）标记在第二抗体或SPA分子上，制备成金标二抗。其原理是当特异性抗体与抗原结合后，用金标二抗或金标SPA与特异性抗体结合，形成抗原-抗体-金标抗体复合物，此时在光镜（10X100倍）下可见红色颗粒物，即为抗原-抗体结合物。该方法称为免疫金染色（immunogold
staining,IGS）。其特点简便、快速（因不需银显影），要求金标抗体浓度高，而且金颗粒直径大于20nm.
二、IGS间接法染色步骤
（1）4/lm石蜡切片常规脱蜡至水，0.05mol/L（pH7.4）TBS洗2×3min.
（2）1%卵蛋白[EA,用0.05mol/L（pH7.4）TBS稀释]温育15min,不洗。
（3）加入适当稀释特异性抗体，37℃温育1h，0.05mol/L（pH7.4）TBS洗2X3min。
（4）0.02mol/L（pH7.4）TBS（内含0.1%BSA）洗10min。
（5）1%卵蛋白温育15min，不洗。
（6）适当稀释的金标记SPA30nm（PAG30nm）室温孵育1~2h,0.05mol/l（pH7.4）TBS洗3X3min。
（7）双重蒸馏水洗5min，1%戊二醛洗10min，双重蒸馏水洗5min.
（8）用0.01%伊文斯蓝衬染3min，50%缓冲甘油封片。
（9）结果观察：阳性呈现红色细颗粒状。
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