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1、取材:外科植皮或手术残余皮肤小块,早产流产儿皮肤更好,取角化层薄者,切成0.5-1平方厘米小块。2、置0.02%EDTA中,室温,5分钟。3、换入0.25%胰蛋白酶中,4℃过夜。4、分离:取出皮块,用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。5、取出表皮,剪成更小的块后,置0.25%胰酶中,37℃,30—60分钟。6、反复吹打,制成悬液。7、培养:用80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸去上清。8、直接加入培养基(Eagle加20%小牛血清)制成细胞悬液,接种入培养瓶,CO2温箱培养。