上皮细胞的培养方法

上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视.但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度往往超过上皮细胞,并难以纯化,同时上皮细胞难以在体外长期生存,因此纯化和延长生存时间是培养关键.

体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜,因此培养在有胶原的底物上可能利于生长,另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层（用射线照射后）时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象.降低PH、Ca2+含量和温度,向培养基中加入表皮生长因子,均有利于表皮细胞生长.

以表皮细胞为例,用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞,其法如下（黑木凳志夫  1981）

1、取材：外科植皮或手术残余皮肤小块,早产流产儿皮肤更好,取角化层薄者,切成0.5－1平方厘米小块.

2、置0.02%EDTA中,室温,5分钟.

3、换入0.25%胰蛋白酶中,4℃过夜.

4、分离：取出皮块,用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开.

5、取出表皮,剪成更小的块后,置0.25%胰酶中,37℃,30—60分钟.

6、反复吹打,制成悬液.

7、培养：用80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸去上清.

8、直接加入培养基（Eagle加20%小牛血清）制成细胞悬液,接种入培养瓶,CO2温箱培养.