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二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为: (1)吸除旧培养液注入另瓶中。 (2)用温BSS冲洗1次。 (3)用0.25%温胰蛋白酶消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。 (4)待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止消化。为防止细胞丢失,可不必再用BSS冲洗,直接向瓶中加入培养液(新旧培养液按2:1 新旧混合)。 (5)轻轻反复吹打制成单个细胞悬液。 (6)按一分为二比例接种培养。