当外泌体遇上环状RNA（七）

（3）circPACRGL作为海绵分子结合miR-142-3p和miR-506-3p
作者使用生物信息学数据库预测发现circPACRGL同时具有miR-142-3p和miR-506-3p的结合位点，双荧光素酶报告实验检测也证实miR-142-3p和miR-506-3p可与circPACRGL直接结合。此外，在CRC细胞来源的外泌体刺激的HCT116和SW480细胞中，miR-142-3p和miR-506-3p表达均显 著降低。这些结果表明，circPACRGL可以海绵吸附miR-142-3p和miR-506-3p，并抑 制二者的表达。

（4）miR-142-3p / miR-506-3p均可调节 TGF-β1
使用生物信息学预测了miR-142-3p和miR-506-3p的下游靶基因TGF-β1。通过双荧光素酶报告实验，证实了TGF-β1是miR-142-3p和miR-506-3p的共同靶基因。qPCR和WB分析进一步表明，转染miR-142-3p/miR-506-3p可显 著降低TGF-β1的mRNA和蛋白水平。为了进一步证实miR-142-3p和miR-506-3p对TGF-β1的调节作用，作者使用miR-142-3p/miR-506-3p 处理CRC衍生的外泌体刺激的CRC细胞，结果显示导入CRC衍生的外泌体后，CRC细胞中TGF-β1的mRNA和蛋白水平均显 著增加，而与miR-142-3p/miR-506-3p共同处理后，TGF-β1表达的促进作用被有效抑 制。综上所述，TGF-β1是miR-142-3p和miR-506-3p的共同靶标。

（5）circPACRGL通过海绵机制吸附miR-142-3p /miR-506-3p进而调控TGF-β1促进CRC细胞增殖、迁移和侵袭
根据以上数据，作者推测circPACRGL可能通过miR-142-3p /miR-506-3p-TGF-β1轴来调控CRC细胞增殖、迁移和侵袭。CCK8结果显示，在CRC衍生的外泌体治 疗组（Ex-HCT116）中，CRC细胞增殖明显高于对照组。敲低circPACRGL显 著降低了CRC细胞增殖，而miR-142-3p/miR-506-3p抑 制剂处理或过表达TGF-β1后，这种抑 制作用会相应减弱。在细胞凋亡实验中也观察到了类似的效果。接下来，划痕实验和Transwell分析均显示CRC衍生的外泌体可以增强CRC细胞的迁移和侵袭能力，而在circPACRGL敲低的细胞中则发生了相反的作用，CRC衍生的外泌体处理可以回补circPACRGL敲低细胞的迁移和侵袭能力。与CCK8和细胞凋亡检测结果一致，miR-142-3p / miR-506-3p抑 制剂处理或过表达TGF-β1显着促进了circPACRGL敲低细胞的迁移和侵袭能力。以上结果表明，circPACRGL通过调节miR-142-3p /miR-506-3p-TGF-β1过程促进CRC细胞增殖、迁移和侵袭。

（6）来源于CRC的外泌体circPACRGL通过miR-142-3p /miR-506-3p-TGF-β1过程调节N1-N2中性粒细胞的分化
上述研究表明，circPACRGL通过miR-142-3p/miR-506-3p-TGF-β1过程促进大肠ai的发展。作者进一步探讨CRC衍生的外泌体circPACRGL是否也可以通过这个轴调节中性粒细胞的N1-N2分化。流式细胞仪检测结果显示，CRC衍生的外泌体可以增加N2中性粒细胞的百分比，这与N2标记物CD11b + / Ly6G + / Ly6Clow的上调相一致。相比之下，在circPACRGL敲低的细胞中，N2中性粒细胞的百分比显着降低，而加入CRC衍生的外泌体后，这种抑 制作用被取消。此外，miR-142-3p/miR-506-3p抑 制剂处理或过表达TGF-β1可以显 著增加circPACRGL敲低细胞中N1-N2的分化。综上分析，CRC衍生外泌体的circPACRGL通过miR-142-3p /miR-506-3p-TGF-β1过程促进N1-N2中性粒细胞的分化。

总结
总体来说，上述三篇研究通过外泌体提取、外泌体鉴定、外泌体环状RNA测序、qRT-PCR、Sanger测序、RNA pull-down+MS/WB、RIP以及双荧光素酶报告实验等方法（云序可提供以上服务），探究外泌体环状RNA通过海绵机制吸附miRNA进而调控下游疾病相关基因mRNA的表达过程，结果影响ai症发展进程。这为研究和理解生物体复杂的外泌体环状RNA调控机制，提供了比较完整的实验研究思路和方案，具有很强的理论先导性和示范性，也为疾病的调控和靶点提供了重要的理论依据。