水质粪大肠菌群的测定滤膜法
1适用范围
本标准规定了测定水中粪大肠菌群的滤膜法。
本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。
本方法的检出限：当接种量为100ml时，检出限为10CFU/L；当接种量为500ml时， 检出限为2 CFU/L。
2规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本 标准。
GB/T 14581水质湖泊和水库采样技术指导
HJ494水质采样技术指导
HJ/T91地表水和污水监测技术规范
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3. 1粪大肠菌群 fecaI col iforms
又称耐热大肠菌群(thermotolerant coliforms)。44.5°C培养24h,能在MFC选择性培养 基上生长，发酵乳糖产酸，并形成蓝色或蓝绿色菌落的肠杆菌科细菌。
3. 2菌落形成单位 colony-forming un i ts (CFU)
单位体积样品中的细菌群落总数。
4方法原理
样品通过孔径为0.45um的滤膜过滤，细菌被截留在滤膜上，然后将滤膜置于MFC选 择性培养基上，在特定的温度(44.5°C)下培养24
h,胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长， 粪大肠菌群能生长并发酵乳糖产酸使指示剂变色，通过颜色判断是否产酸，并通过呈蓝色或
蓝绿色菌落计数，测定样品中粪大肠菌群浓度。
5干扰和消除
5.1活性氯具有氧化性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集(8.1) 时加入硫代硫酸钠溶液（6.6）消除干扰。
5.2重金属离子具有细胞毒性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品 采集（8.1）时加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.7）消除干扰。
6试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂或生物试剂，实验用水为蒸馅 水或去离子水。
1 MFC培养基：
胰腺 10 g
蛋白腺 5g
酵母浸膏 3g
氯化钠 5 g
乳糖 12.5 g
胆盐三号 1.5 g
1%苯胺蓝水溶液 10 ml
1%玫瑰红酸溶液（溶于8.0 g/L氢氧化钠液中） 10 ml
将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰红酸外），溶解于1000 ml水中，调节pH至 7.4,分装于三角烧瓶内，于115°C高压蒸汽灭菌20
min，储存于冷暗处备用。临用前，按上 述配方比例，用灭菌吸管分别加入巳煮沸灭菌的1%苯胺蓝水溶液1 ml及1%玫瑰红酸溶液 （溶于8.0
g/L氢氧化钠液中）1ml,混合均匀。如培养物中杂菌不多，则不加玫瑰红酸亦
可。加热溶解前，加入1.2%〜1.5%琼脂可制成固体培养基。也可选用市售成品培养基。配
制好的培养基避光、干燥保存，必要时在5°C±3°C冰箱中保存，分装到平皿中的培养基可
保存2〜4周。配制好的培养基不能进行多次融化操作，以少量勤配为宜。当培养基颜色变 化，或脱水明显时应废弃不用。
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