建立了加速溶剂萃取-QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱测定药食同源性食品中16种真菌毒素的方法。样品经过加速溶剂萃取后用QuEChERS方法净化，液相色谱分离，在正、负离子同时扫描和多反应离子监测模式下检测，黄曲霉毒素B1和伏马毒素B1采用内标法定量，其余毒素采用基质外标法定量。在较宽的线性范围内，16种目标化合物的线性相关系数均大于0.99。该方法的检出限为0.008~0.3 μg/kg，定量限为0.03~1.0 μg/kg，在3个不同添加水平下的加标回收率为70.8%~118%，RSD为2.5%~10.2%。采用建立的方法分别对市面上销售的30个批次的山银花、葛根和沙棘产品进行检测，部分产品检出不同含量的真菌毒素。该方法快速、灵敏，适用于药食同源性食品中多种真菌毒素的同时检测。
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样品前处理
萃取
准确称取粉碎过筛后的样品5.00 g, 加入黄曲霉素B1同位素内标工作液和伏马毒素B1同位素内标工作液各400 μL, 然后加入1 g氯化钠, 并与适量硅藻土混匀后, 移入34 mL不锈钢样品萃取池中进行加速溶剂萃取。萃取试剂为乙腈-水-乙酸(85:12:3, v/v/v), 萃取温度75 ℃, 加热时间5 min, 静态萃取时间5 min, 循环2次, 冲洗体积为60%萃取池体积, 萃取后氮气吹扫100 s, 收集萃取液于60 mL收集瓶中。最后将萃取液转移至鸡心瓶中, 于45 ℃水浴中减压浓缩至近干, 加入20 mL乙腈-水(85:15, v/v)充分溶解残渣, 待净化。
净化
取上述待溶液5 mL于离心管中, 加入0.6 g -NH2、0.4 g PSA、0.25 g C18, 涡旋振荡5 min。以10 000 r/min离心5 min, 吸取1 mL上清液于室温氮吹至近干, 加入1 mL含0.1%(v/v)甲酸的乙腈-水(3:97, v/v)复溶, 过0.22 μm微孔滤膜, 待上机。
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分析条件
反相色谱柱:Kinetex XB-C18柱(100 mm×3 mm, 2.6 μm, 美国Phenomenex公司)； 柱温:40 ℃； 流动相A为0.1%(v/v)甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸铵), B为0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液； 流速:0.4 mL/min。梯度洗脱条件:0~0.5 min, 3%B； 0.5~1.0 min, 3%B~10%B； 1.0~6.0 min, 10%B~90%B； 6.0~7.5 min, 90%B； 7.5~7.6 min, 90%B~3%B； 7.6~9.0 min, 3%B。进样体积:10 μL。
离子源:电喷雾电离(ESI)源, 采用正、负离子同时扫描模式； 喷嘴电压:5 500 V(+)/-4 500 V(-)； 毛细管温度:600 ℃； 气帘气压力0.207 MPa； 碰撞气电压强度:medium。
结论
本文建立了一种基于ASE和QuEChERS联用的前处理技术, 结合超高效液相色谱-串联质谱同时检测药食同源性食品中16种真菌毒素的检测方法。与传统方法相比, 本方法减少了有机溶剂用量, 缩短了检测周期, 提高了检测灵敏度, 检出限、定量限远低于国家标准对真菌毒素限量检测要求和欧盟、日本等国家规定的最大残留量。方法学考察及实际样品检测证明, 该方法具有实用性强、灵敏度高、操作简便快速等优点, 能够满足国内外对植物源性药食同源产品中多种真菌毒素的检测要求。
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