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临床微生物培养基手册(一)

2021.4.26
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

营养琼脂(普通琼脂)
成份:牛肉浸液(或其它浸液,消化液或肉膏汤)   100毫升
      琼脂(视天气,琼脂质量而定)
制法:将上物加热溶解,补足水,调ph至7.6,过滤分装121℃,高压灭菌15分钟。
用途:作普通琼脂平皿。

血琼脂平板(BA)
制法:取营养琼脂(PH7.6),加热使其溶解待冷至45-50℃,以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀,立即倾注于平板或分装试管,制成斜面备用。
用途:1. 一般棉拭子均接种此培养基。
      2.尿液,脓液
      3.分离细菌标本用。

基础培养基 (肉膏汤BB)
成份:蛋白胨  10克       牛肉膏    5克      
      氯化钠   5克        水       1000毫升
制法:将以上各物称好,加水煮沸溶解,用1NNOH校正PH至7.6,过滤分瓶,121℃高压灭菌,20分钟备用。
用途:1 作耐药试验,增菌用分装小管。
      2 作普通琼脂斜面。

血液培养基(大管肉汤培养基)
成份:1  新鲜牛肉浸液    1000毫升    
      2  PABA(对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕)   1g%  1毫升
      3  MgSO4   [相当于0.493/100毫升]           49.3%  1毫升
      4  枸椽酸钠                                     0.3g
制法:1  将1号,4号混合液,2号,3号液分装高压灭菌。
      2  取灭菌1,4号混合液用无菌法加入PABA,MgSO4,再分管,行无菌试验三天方可使用。
用途:作血,骨髓培养用。

肠道杆菌培养基(伊红美兰琼脂)
成份:  蛋白胨     10克            乳糖      10克
        氯化钠     5克             琼脂      25(22)克
        水         1000毫升        2%伊红溶液20毫升
        0.5%美兰溶液   20毫升
制法:将蛋白胨,氯化钠琼脂称好,加水1000毫升使溶解,校正PH7.4过滤,补足失水,加入2%伊红溶液20毫升,0.5%美兰溶液20毫升,(115℃高压20分钟),冷却至50℃左右倾注平板,凝固后存冰箱备用。(高压以后方可再加乳糖)

用途:用作分离沙门氏,志贺氏菌属,也作菌群调查。
                                      

罗文斯坦培养基
成份:磷酸二氢钾       2.4克              硫酸镁   0.24克
      枸椽酸钠         0.6克              天门冬素  3.6克
      纯甘油(丙三醇) 12毫升              水       600毫升
      马铃薯粉         30克               鸡蛋    1000毫升(约3公斤)
      2%孔雀绿水溶液  20毫升        
制法:1  除鸡蛋外(还有孔雀绿)。可将其它物品称好,放入大三角瓶包扎好,高压灭菌。
      2  鸡蛋用75%酒精泡30分钟,灭菌法打蛋,倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。
      3  将各成份按比例配好,分装每管约5毫升。
      4  间歇灭菌第一次90℃1小时,第二次80℃半小时,第三次80℃半小时(或放85℃烤箱内连续二次)。
质控标准: 1  灭菌试验合格。
           2  接种结核杆菌要求两星期生长良好。
用途:作结核分枝杆菌培养用。

结核半固体培养基
成份:磷酸氢二钠      19克               硫酸镁      0.6克
      磷酸二氢钾      2.5克              天门冬素    5克
      1%孔雀绿       1.5克              甘油         20毫升
      吐温80(10%)  5毫升             水          1000毫升
      枸椽酸钠        2.5克              动物血清    100毫升
      琼脂            1.5克(80小时用甲醇去脂)
      1%孔雀绿       0.78毫升          吐温80(10%) 5毫升
      加动物血清      100毫升
制法: 1  除血清外将上述药品均称好,放入煮沸溶解,调PH7。2
       2  分管(每管约10毫升)包扎好,高压,121℃半小时灭菌。
       3  待冷后无菌法加无菌血清(绵羊血或兔血)每管约1毫升备用。

4  去除琼脂方法:取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封,放37℃温浴80小时,每天摇动一次,冷却后到时取出用滤纸过滤,待琼脂自然冷却后备用。
质控标准:1无菌实验合格。
          2琼脂硬度合适而清亮。
          3接种标准结核杆菌用,强度合适即可用。
用途:培养结核杆菌用。

亚碲酸钾血琼脂平板
成份:琼脂基础     100毫升         10%葡萄糖      2毫升
      1%亚碲酸钾  4.5毫升          绵羊血         10毫升
制法:1将琼脂基础溶解好,加入羊血。
      2马上加热使成咖啡色后,稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4.5毫升混合后倒入无菌平板,  
                                       

        凝固后存冰箱备用。
质控标准:接种白喉杆菌生长良好,其它革兰氏阴性菌均抑制生长。
用途:供培养及鉴别白喉杆菌用。            
                                      
米培养基
成份:白米         20克               水      1000毫升
      琼脂         20克              吐温80   10毫升
制法:1将20克米加水200毫升煮沸45分钟,煮时将容器盖好。
      2用纱布过滤,只要米汤,不要饭,加水至1000毫升。
      3加琼脂20克,吐温-80 10毫升煮溶,分装中型管(每管约3毫升),包扎好,高压,121℃半小时,消毒备用。
质控标准:1灭菌。
          2要求清亮。
          3接种白色念珠菌17-24小时生长良好,并产生厚膜孢子。
用途:培养白色念珠菌用。

蛋白胨水培养基
成份:蛋白胨     1克          氯化钠       0.5克
      水加至    100毫升        PH调至      7.8
制法:把以上各物称好溶于水,调节PH7.6分装消毒备用。
质控标准:1  放置37℃无菌生长。
          2  接种大肠杆菌24小时生长良好。
          3  可作中国兰平板基础液。
          可作靛基质基础液(作此试验需要色氨酸蛋白胨)。

血培养基
成份:蛋白胨     10克           牛肉膏      5克
      氯化钠     5克            葡萄糖      3克
      枸椽酸钠   3克            MgSO4。7H2O  20毫升
      0.5%PABA  10毫升       酵母浸液   10毫升   0.2克(2%过滤)
      *酚红0.4%   6毫升         水      1000毫升
       琼脂       0.5克        
*:作大BB,小BB时,不要加酚红和琼脂。
制法:1。除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7.4
      2。调好PH后再加酚红。
      3。硫酸镁、PABA另外无菌再加入(亚细,小BB)    

沙氏培养基
成份:蛋白胨      1克                         水       100毫升
      琼脂        1.5克(琼脂粉1克%)      葡萄糖或麦芽糖   4克
                                        
制法:1将上述物质称好,放入水中煮沸溶解(不必调PH即有5左右)分中号试管(约4毫升)包扎,高压115℃20分钟。
      2 趁热斜好,凝固备用。
质控标准:1无菌试验合格。
          2接种霉菌比在其它培养基上生长良好,其它菌生长不好。
用途:作分离培养霉菌用。
注意:1  接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12.5%氯霉素沙氏斜面培养基上。    
     2  也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。

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