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临床微生物培养基手册(二)

2021.4.26
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

肉渣培养基
成份: 牛肉渣             牛肉浸液(牛肉膏)
制法:将做牛肉浸液的牛肉渣,装入试管,高约3毫米,加入牛肉浸液或牛肉膏汤(PH7.6)约5毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高约0.5厘米(不加也可),121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用 。
用途:用于厌氧菌培养。
注意:如无肉渣也可用牛、羊血等代替,将血块先放入水内煮沸,取出成小块,血块在加热后摇匀成碎颗粒状。

单糖发酵管培养基(半固体)

成份: PH7.6-7.8蛋白胨水     1000毫升(0.3克/100毫升)
       1.2%酚红液          0.4毫升
       琼脂                  0.4 - 0.5克
       10%糖或醇            10毫升
制备:把蛋白胨水,琼脂加热溶解,然后加1.2%酚红液0.4毫升,10%糖10毫升,混匀,分装试管,每管约2-3毫升,经115℃高压灭菌20分钟后,分置于试管架上,贴上各类糖或醇类标签备用。
质控标准:细菌发酵糖类或醇而产生酸,能使培养基PH改变,指示剂由红变黄色,如因发酵产生气体则  
          半固体内产生气泡,如有动力则半固体由清亮变混浊。

明胶培养基
成份:肉浸液        1000毫升(牛肉浸膏5克)
      明胶          12克
制法:
   100毫升肉浸液中,加入明胶12克,隔水加热煮化,校正PH7.2,分装小号试管,用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟,连续3日,或者108℃高压20分钟,冷却,贮存备用。

碱性蛋白胨水
成份:
   蛋白胨      20克             氯化钠      5克
   硝酸钾       0.1克          结晶碳酸钠(NaclCO3.12H2O)  0.2克
   水          1000毫升
                                      



制法:将蛋白胨,Nacl,硝酸钾,结晶碳酸钠称好,溶于1000DW中,校正PH8.4分装试管,121℃高压
      灭菌15分钟后备用 。
用途:用于霍乱弧菌培养。
                                      
葡萄糖蛋白胨水(M。V用)
成份:蛋白胨        5克             葡萄糖         5克
      K2HPO4       5克              水          1000毫升
制法:将上述称好溶解分装试管,调PH7.4高压灭菌115℃ 灭菌20分钟 ,或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管
标准:灭菌试验合格。
      接种大肠杆菌VP阴性,M阳性;接种产气杆菌VP阳性,M阴性。
用途:作鉴别肠道杆菌用。

枸椽酸盐培养基
成份:磷酸二氢铵    0.1克           硫酸镁      0.02克
      磷酸氢二钾    0.1克           枸椽酸钠    0.23--0.5克(0.36)
      氯化钠        0.5克           琼脂        1.5克
      0.5%溴麝香草酚兰2毫升 (调PH6.8再加)
制法:将上述称好,放入水中煮沸溶解,调PH6.8,然后分装中号试管,高压灭菌,趁热倒呈斜面,凝固
      后备用。
标准:1灭菌试验合格,培养基呈果绿色适宜。
      2接种大肠杆菌,培养基上不生长,也不变色。
      3接种产气杆菌,培养基呈深兰色。
用途:作鉴别大肠杆菌用。

双糖铁培养基
成份:
    下层:蛋白胨    1克            氯化钠      0.5克    
          葡萄糖    0.2克         琼脂       0.3-0.5克
          水       100毫升
       将上述物质混匀调PH7.6后加1.2%酚红0.4毫升
    上层:蛋白胨     1克         氯化钠      0.5克
          乳糖       1克         硫代硫酸钠   0.03克
          硫酸亚铁  0.02克      琼脂         1克
          水       100毫升
制法: 1将下层配好,分装中号试管(1毫升),塞好包扎,15磅高压灭菌半小时,使凝固后备用。
       2制上层时,先将蛋白胨水制好,加入硫酸亚铁,硫代硫酸钠,加热溶解PH8.1,再加入酚红分瓶,(每瓶300毫升,称取琼脂包扎灭菌,趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112℃消毒15分钟)。
       3取已制的下层管,每管用无菌法倒入上层液约1。5毫升,边斜放置使成斜面,凝固后备用。
标准:无菌试验合格,接种大肠杆菌下层产酸产气,上层产酸。




尿素培养基
成份:蛋白胨       0.1克         氯化钠      0.5克
      磷酸二氢钾   0.2克         尿素        0.2克(或10%2毫升)
      葡萄糖      0.01克(或10%葡萄糖0.1毫升)
       H2O       100毫升         酚红(0.2%)    0.4毫升


制法:1除葡萄糖,尿素外把其它药品称好放入水中煮沸,使溶解,调PH7.2过滤,15磅高压灭菌15分钟.
      2配制尿素(灭菌)液:每100毫升基液内加2毫升.
      3配制10%葡萄糖(灭菌)每100毫升加0.1毫升.
      4分装小试管待用.
标准:
     1灭菌试验合格.
     2接种变形杆菌24小时呈红色.
用途:鉴定变形杆菌用.




胆盐中性红琼脂
成份:蛋白胨琼脂PH7.2-7.4       5000毫升
      胆  盐                        2.5克
      乳糖                          5.0克
      对氨基苯甲酸                  25毫克
      1%中性红溶液                 25毫升
制法:
    将胆盐,对氨基苯甲酸,乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中,待冷至50-60℃时,加入1%中性红液2.5毫升,混合后即倾注平皿,凝固待用.
*:1%中性红:1克中性红加酒精60毫升,加水40毫升



丙二酸盐培养基(缩苹果酸钠)
成份:丙二酸钠      0.3克        酵母浸膏        0.1克
      Nacl          0.2克        硫酸铵          0.2克
      K2HPO4      0.06克       KH2PO4         0.04克
      水            100毫升
      PH6.8,高压灭菌备用.
      0.2%溴麝香酚兰乙醇  1.25毫升
制法:与枸椽酸盐利用试验相类似,是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源.无机铵盐为氨源而生长,生长者使培养基变成碱呈兰色.
鉴定:   克氏杆菌     (+)            赫夫尼亚     (+)
         沙门氏菌      (—)          痢疾杆菌      (—)


苯丙氨酸培养基
成份:酵母浸液   1.5克          DL--苯丙氨酸     1克
      磷酸氢二钠(无水)0.5克(或L-苯丙氨酸     0.5克)
      氯化钠     2.5克               琼脂           6克
      水         500毫升               PH7.4
制法:1  将上述成份加热溶解,分装于12*125mm口径的试管中,每管约4毫升.
      2  高压灭菌15磅10分钟,趁热使试管斜置凝固后备用.
      3  接种时划斜面.
用途:鉴定沙门氏菌用.苯丙氨酸脱氨酶试验沙门氏菌阴性.



双抗培养基
成份:
     蛋白胨      10克            牛肉膏      5克      
     氯化钠      5克             无水亚硫酸钠  3克
     柠檬酸钠   10克             蔗糖       10克
     琼脂粉     20克             水         1000毫升
制法:
    1将上物称好,加热溶于水中.
    2调PH8.2—8.4
    3 分装高压灭菌后备用.
    倾注平板前先加热溶解琼脂等冷至50℃左右,按无菌操作加入多、庆抗菌素充分摇匀, 倾注平板,凝固后备用.
    (庆大霉素:150u/毫升,多粘菌素:1500u/毫升, 2毫升加至1000毫升培养基内,此相当于庆大霉素0.3u/毫升, 多粘菌素3u/毫升)


O2培养基
保存液:(文—腊氏液)
A液:硼酸    12.405克           KCL    14.912克
      水      1000毫升    
   取A液250毫升 0.8%NAOH    133.5毫升
     NACL       20克               水       1000毫升
     分装高压灭菌.




硝酸盐胨水
成份:
     蛋白胨     1克
     硝酸钾(无NO2)    0.1克  
     H2O        100毫升
      PH7.4,高压灭菌分装备用.

(如无硝酸钾也可用硝酸钠0.02克,NACL0.05克,H2O100毫升)
用途:硝酸盐还原试验用.
原理:测定细菌能否还原硝酸盐为亚硝酸盐,后者在酸性条件下与a—萘胺和对氨基苯磺酸发生重氮反应,生成红色的1-萘-4偶氮苯对磺酸.
制法:试剂甲液A对氨基苯磺酸0.8克溶于5N的醋酸100毫升.
    B:乙液a-萘酚0.5克溶于5N的醋酸100毫升中
    将细菌接种于硝酸盐水中37℃培养24--96小时,加入甲液0.1毫升,再加入乙液数滴,立即呈现红或紫色为阳性


  king氏培养基(能促进绿脓菌绿色素产生)
成分:
      蛋白胨         2克                   K2SO4        1克
      甘油           1克                   MGCL2       0.14克  
      琼脂           1.5克                  H2O         100毫升
               KING氏培养基(能促进绿脓菌荧光色产生)
成分:
      蛋白胨         2克                   甘油          1克
      K2SO4         0.15克                 MGSO4       4.7克           H2O      0.15克
      琼脂           1.5克                  H2O          100毫升
      调PH7.2       15磅20分钟消毒后使成斜面备用.

               七叶苷水解试验
原理:
     粪链球菌能分解七叶苷(Escalin)其代谢产物与铁离子结合产生黑色沉淀,使培养基变黑.
方法:
     将菌种接种在七叶苷或琼脂上37℃18小时,观察结果,培养基变黑色,其他链球菌能生长但不变黑色,肺炎链球菌不长.
成分:  
     七叶苷       0.1克                     胰胨           1.5克
     枸橼酸铁     0.2克                     琼脂           2.0克(0.5克/50毫升)
     胆汁         2.5毫升                     H2O            100毫升
     PH7.0分装小试管内高压灭菌后备用(10磅20分钟)
     七叶苷又名桑树皮甙,七叶灵,Aesclin  Escnlim  Bicolorin等.为白色针状结晶.水溶液兰色荧光.)

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