淋病奈瑟菌的检验

 淋病奈瑟菌简称淋球菌，是常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜，人类是其唯一的天然宿主和传染源。人类对淋球菌无自然免疫力，均易感，病后免疫力不强，不能防止再感染。 

   
   1  生物学特性
 

    1.1 形态与染色  淋球菌呈肾形或咖啡豆形，菌体直径0.6～0.8 μm。常成对排列，邻近面扁平或稍凹陷，形似咖啡豆。在急性感染的机体内，其形态较典型，通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外。从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛，经人工培养后，呈卵圆形或球形，排列不规则。无鞭毛和芽孢。淋球菌革兰染色阴性。用碱性美蓝染色时，菌体呈蓝色。用Pappehheim Saathof染色时，菌体呈红色，背景为天蓝色。
 

    1.2 结构  淋球菌外面结构为外膜，外膜的主要成分为膜蛋白、脂多糖和菌毛。膜蛋白可使淋球菌黏附于人体黏膜上，通过细胞吞噬作用进人细胞，在细胞内大量繁殖，导致细胞崩解，淋球菌扩散到黏膜下层引起感染。菌毛易黏附于子宫腔和口腔上皮细胞表面，有致病力及传染性。
 

    1.3 培养特性  淋球菌培养要求高，一般不易培养，需在培养基中加入血液、血清或多种氨基酸和无机盐类物质。淋球菌最适PH为7.5，最适温度为35-37℃。常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。初次分离培养在血琼脂或巧克力琼脂上5%-10%CO2条件下生长良好，经24-48h培养后，可见表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直径0.5-1.0mm的圆形菌落
 

    1.4 生化反应  淋球菌可发酵葡萄糖、产酸，但不发酵麦芽糖、蔗糖和乳糖。氧化酶和触酶试验均阳性。
 

    1.5 抵抗力  淋球菌有自溶现象，因其能产生自溶酶，易发生自溶造成死亡。淋球菌对外界理化因素的抵抗力较弱，对热作用很敏感；不耐干燥，在完全干燥的环境中1～2 h即死亡，但若附着于衣裤和被褥中，则能生存18～24 h。淋球菌对消毒剂的抵抗力极差，1%苯酚溶液能在3 min内将其杀灭，1：4000硝酸银溶液7 min可将其杀死，除耐药菌株外，淋球菌对抗生素敏感，但抗生素的最小抑菌浓度逐渐有所提高。
 

    2  致病机制 
 

    淋球菌对柱状上皮细胞和移行上皮细胞有特别的亲和力。男女性尿道和女性宫颈覆盖有柱状上皮和移行上皮，故易受淋球菌侵袭。淋球菌菌毛上的特异性受体可与黏膜细胞相应部位结合；其外膜蛋白Ⅱ可介导黏附过程；它还可产生IgAl蛋白酶，降解具有抑制其粘附于黏膜表面作用的IgA。这样，淋球菌与上皮细胞迅速黏和，然后被吞噬到细胞内。一旦进入细胞，便开始繁殖，直至充满整个细胞。淋球菌释放内毒素，介导免疫反应从而引起上皮细胞受损。细胞溶解后释放淋球菌至黏膜下间隙，引起黏膜下组织感染。淋球菌通过其内毒素脂多糖、补体和IgM等协同作用，形成炎症反应，使黏膜红肿。淋球菌感染后造成的炎症可沿泌尿、生殖道蔓延播散，在男性可扩展至前列腺、精囊腺、输精管和附睾，在女性可蔓延到子宫、输卵管和盆腔。严重时淋球菌可进入血液循环系统，播散到身体其他部位。 
 

    3  微生物学和医学分子生物学检验 
 

    3.1 标本采集  男性患者采用尿道口脓性分泌物及一次性拭子插入尿道内2-4cm处取分泌物；女性患者则以一次性拭子插入宫颈口0.5-1cm处取分泌物黏液。将上述取得的分泌物，首先轻轻涂布于载玻片上；然后取分泌物于无菌试管中，注意保湿保暖并及时送检。
 

    3.2 实验室鉴定方法
 

    3.2.1 直接涂片染色法  涂片直接革兰染色后在显微镜下观察，可见淋球菌呈革兰染色阴性，菌体呈卵圆形或肾形，常成对排列，两菌以平坦面相靠，形似一对咖啡豆。有时可见淋球菌位于中性粒细胞内。一旦发现形态典型的革兰阴性双球菌，报告为“找到革兰阴性双球菌咖啡豆形，成双排列，分布于多形核细胞内外，形似淋球菌”。该方法检出率较低，但特异性高且经济实用、简便易行。 
 

    3.2.2 细菌分离培养法  取分泌物直接连续划线接种于血琼脂或巧克力琼脂平板上，置于含5%-10%CO2，35℃培养箱内培养24h后，观察发现直径0.5-1mm，呈圆形、光滑、湿润、凸起、半透明或灰白色菌落。淋球菌具有氧化酶和触酶，分解葡萄糖产酸，不分解蔗糖、麦芽糖和乳糖。细菌培养是检验诊断淋球菌感染的“金标准”，目前仍为诊断淋病最可靠的方法。但淋球菌对外环境抵抗力极弱，对冷、热、干燥和化学消毒剂大都敏感；且临床标本的采集、输送、培养接种方式等都可能影响检验结果的准确性。
 

    3.2.3 快速检测法  采用淋病检测试纸进行检测，与比色卡阳性颜色相比，试纸变色一致则确认为阳性。
 

    3.2.4 荧光定量PCR法  具体操作步骤严格按照PCR试剂盒说明书进行操作。最后结果判断时在紫外线投射分析仪上观察，与阳性对照区带相同，清晰、规则、明亮、较窄的区带判为阳性，否则为阴性。该方法是一种较为先进的分子生物学检验技术，借助于一种DNA扩增技术，能将含微量淋球菌的标本处理经2-3 h后扩增放大几百万倍，属于一种基因诊断技术。它具有特异性强、灵敏度高、简便、快速、对标本的纯度要求低等优点。