学鉴定试验操作要点氢氧化钾拉丝试验：
(1)原理：革兰阴性的细胞壁在稀碱溶液中易于破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使氢氧化钾菌悬液呈现粘性，可用接种环搅拌后拉出粘丝来，而革兰阳性细菌在稀碱溶液中没有上述变化。
(2)方法：取1滴40g/L氢氧化钾水溶液（应新鲜配制）于洁净玻片上，取新鲜菌落少许，与氢氧化钾水溶液搅拌混匀，并每隔几秒钟上提接种环，观察能否拉出粘丝。
(3)结果：用接种环拉出粘丝者为阳性，仍为混悬液者为阴性。
(4)应用：主要用于革兰阴性菌与易脱色的革兰阳性菌的鉴别。大多数革兰阴性菌于5~10s内出现阳性反应，有的则需30~45s，假单胞菌、无色杆菌、黄杆菌、产碱杆菌、莫拉菌等大多数在10s内呈阳性，不动杆菌、莫拉菌反应较慢，大多数菌株在60s内出现阳性，而革兰阳性菌在60s以后仍为阴性。
注意：
1.试验一般使用3-5%KOH%较好,常用4%比较方便(用V-P反应用40%KOH稀释10倍即可）。
2.4%KOH量不能太多，菌量不能太少，尤其不动杆菌，4%KOH要少一点，菌要多一点，否则易导致阴性。
3.要用新鲜培养物。
4.对于不动杆菌，因不容易拉起丝，不容易脱色，所以容易误认为阳性菌，操作时应讲究技巧：
用少量的5%KOH，取多量的细菌充分研磨，还需要将菌用环拖到KOH边缘处拉丝,即可出现丝状物(即阳性)，切不可急躁。
5.几乎所有阳性菌对vancomycin敏感.所以可结合万古霉素敏感试验区分革兰阴性和阳性菌，前者耐药后者敏感（但有些阳性菌耐万古霉素，如：鹑鸡肠球菌、铅黄肠球菌、部分红斑丹毒丝菌、乳杆菌、星形奴卡氏菌、链霉菌）。因几乎所有阴性菌对colistin敏感，所以可以利用多粘菌素敏感试验区分阴阳性菌，但有些阳性菌可以出现敏感现象，这可以用于区分某些葡萄球菌：金黄色葡萄球菌对多粘菌素B耐药，中间葡萄球菌对多粘菌素B敏感。
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