食品检测--腹泻性贝类毒素检验方法

本方法可以用于检验海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的腹泻性贝类毒素。

一、样品的制备
①生鲜带壳样品,用刀切开闭壳肌开壳取出贝肉。不得以加热及加药物的方法开壳。注意不要破坏闭壳肌以外的组织,尤其是中肠腺(又称消化盲囊,组织呈暗绿色或褐绿色)。将去壳贝肉放在孔径约2mm的金属网上控水5min,按④或⑤制备检样。

②冷冻的带壳样品,使其在室温下呈半冷冻状态后,以前述方法开壳取肉,这时的贝肉仍呈冷冻状态。经除去贝壳外部附着的冰片,轻轻抹去水分后,按④或⑤制备样品。

③事先已除水分的冷冻去壳贝肉,按④或⑤制备样品。

④扇贝、贻贝、牡蛎等可以切取中肠腺的去壳贝肉,称量200g 贝肉质量后仔细切取全部中肠腺,将中肠腺称重后细切混合作为检样。同时,注意不要使中肠腺内容物污染案板。

⑤对不便切取中肠腺的去壳贝肉样品,可将全部贝肉细切,混合,作为检样。

⑥为避免毒素的危害,应戴手套进行检验操作。移液管等用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上,以使毒素分解,同样,废弃的提取液等也应以上述溶液处理。

二、测定方法
①方法提要  用丙酮提取贝类中毒素,再转移至乙醚中,经减压浓缩至干后,再以1%吐温-60生理盐水溶解残留物注射小白鼠观察存活情况,计算其毒力。

②试剂和材料  丙酮(分析纯)、乙醚(分析纯)、1%吐温-60生理盐水。

③仪器和设备  旋转蒸发器、均质器、天平(感量0.1g)、刻度试管(15mL,具有0.2mL刻度)、注射器(1mL)及针头、体重为16～20g 的健康 ICR 系雄性小白鼠。

三、测定步骤
①提取

a.将检样置于均质杯中,加入3倍量丙酮至少均质2min。

b.用布氏漏斗抽滤,收集提取液。

c.对残渣以检样两倍量丙酮再抽滤两次,合并抽滤液。

d.将抽滤液移入旋转蒸发瓶中,减压浓缩去除丙酮直至液体表面分离出油状物。

e.将浓缩物移入分液漏斗内,以100～200mL 乙醚和少量的水洗下粘壁部分,以不生成乳浊液的程度轻轻振荡,静置分层后去除水层。

f.用相当乙醚半量的蒸馏水洗醚层两次,再将醚层移入300～500mL 的茄形瓶中,减压浓缩去除乙醚。

g.以少量乙醚将浓缩物移入50或100mL 茄形瓶中,再次减压浓缩去除乙醚。

h.以1%吐温-60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL。以中肠腺作为检样的,此时1mL 液量相当于预先测定的20g 去壳贝肉的质量。对其他检样,此时1mL液量也相当于20g 去壳贝肉的质量,以此悬浮液作为试验溶液。

i.如必要时,对试验溶液可做进一步稀释,稀释前,应先以振荡器使试液成均一悬浮物,再取其部分以1%吐温-60生理盐水稀释成4倍或16倍的试液。

②小白鼠试验

a.以振荡器使试液或其稀释液成为均一的悬浮液。

b.分别将1mL 试液注射到三只体重16～20g 的健康 ICR 系雄性小白鼠腹腔中。

c.按上项方法,注射1%吐温-60生理盐水,作为阴性对照。

d.观察自注射开始到24h 后的小白鼠存活情况,求出一组三只中死亡两只以上的最小注射量。

e.小白鼠注射腹泻性贝类毒素后的症状为运动不活泼,大多呼吸异常,致死时间长(也有24h 以上的)。

四、结果计算和表述
毒力的计算:使体重16～20g 的小白鼠在24h 死亡的毒力为1个小白鼠单位(MU),实际小白鼠单位的计算,按下表从一组三只中两只以上在24h 内死亡的最小注射量及最大稀释倍数进行计算。

注射量与毒力的关系