化学法曾于很长一段时间用于常规检查，一般包括：①抽提；②皂化；②毛地黄皂苷沉淀纯化；④显色比色四个阶段。其操作复杂，干扰因素多，现多已不用，代表性的方法是省去③步骤的Abell-Kendall法，现作为标准参考方法予以利用。现临床应用胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶及过氧化物酶的方法，快速准确，标本用量小，可完全在自动生化分析仪上操做，适于大批量标本的检查。
胆固醇酯首先在胆固醇酯酶的催化下水解成游离胆固醇，胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的催化下以Trinder反应显色测定。
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