【1】抗体的说明上，都给出了一个范围，可以以这个范围为根据摸索。开始的时候可以把膜剪成几小块，每一块用不同的一抗二抗浓度，这样就可以比较快的摸出适宜的浓度。有些时候也有一定的经验的：我用的是SANTA CRUZ的抗体，一抗建议的稀释比是1：200－1000，我用的是1：400效果挺好的。周围的人用的这个公司的其他一抗也是建议这个稀释比，他们也是稀释成了1：400，效果也挺好的。所以，如果用的是这个公司的一抗，如果建议的稀释比和上面相同的话，建议先用1：400试一下。
【2】如果背景深，考虑二抗浓度高了，可以降低二抗浓度。当然没封闭好等很多其他原因也可以引起背景过高。
【3】如果杂带较多，可以考虑降低一抗的浓度。如果没有条带，则可以考虑增加一抗的浓度。
【4】当然，在摸索抗体浓度的同时，要保证其他步骤的完善、合理性：转膜成功、封闭的要好、上样量是否合理（不要太大了）等。
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