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如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NEBuffer,那就可以同时双酶切。如果找不到就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应。