2.结果
2.1 实验室检查
抽血查免疫全套检测免疫力及特异性免疫抗体。免疫抗体阴性，无自身免疫疾病。CD4、CD8数量基本正常，免疫功能基本正常。Anti-HIV阴性。但IgE升高明显（218.7 U/mL，正常值0.1~150 U/mL），中性分叶核细胞增高（7.56×109/L，正常值1.8~6.3×109/L），提示感染血象。
2.2 原代涂片镜检结果
原代涂片发现唾液中有大量极长链的细菌，需要3~4个100×视野才能照完长链，如图1；龋损样本中有螺旋体和弯曲菌，黏膜拭子涂片显示菌极少，有部分链球菌、杆菌和放线菌（结果未显示）。
图1 唾液样本原代涂片镜检革兰染色图
2.3 细菌原代培养总体情况
选择培养基科玛嘉中可见变异链球菌（C.albicans）在全菌斑中含量最多，为2100 CFU/mL，唾液中为550 CFU/mL（表1）。4种样本中MS、Rogosa选择培养基中的链球菌和乳杆菌数量巨大，难以计数。基础培养基分离培养过程中并未见到原代涂片中极长链的细菌，唾液中总菌含量最高（7.6×107 CFU/mL），龋损中溶血菌含量最高（43.5%，表2）。
表1 初代科玛嘉平板中真菌的数量
表2 初代BHI血平板中的溶血菌数量
2.4 细菌分离鉴定结果
以全菌斑稀释10-4（A4），挑取不同外形的菌落，传代至纯种，经生化和DNA测序鉴定，结果如表3所示。
表3 不同标本中细菌分离鉴定结果
全菌斑分离出多种链球菌（如戈登链球菌、变异链球菌、中间链球菌、咽峡炎链球菌）、龋损菌斑中多次分离到变异链球菌以及苏黎世链球菌，Rogosa选择培养基分离了多种乳杆菌，另外还鉴定了栖牙普雷沃菌、具核梭杆菌、殊异韦荣菌、韦德纤毛菌和戴安娜月形单胞菌。
2.5 变异链球菌含量
如图2所示，变异链球菌（S.mutans）在4种样本中含量均较高，其中黏膜样本（N）的相对含量最高，与健康组H1、H2相比均有显著差异；Q和T中的变异链球菌相对含量也显著高于健康组中的H2（P<0.05）。
图2 qPCR检测S.mutans相对含量
2.6 DGGE结果
患者RC中A、N、Q和T与健康组（H1，H2）及另两例猖獗龋（RC1，RC2）相比，DGGE示（图3）细菌多样性（条带数）明显降低，但丰度明显增强（条带亮度）；T的多样性最高、N最少；变异链球菌在4种样本均有检出；血链球菌无明显条带；干酪乳杆菌有较弱条带。切取差异明显的13条带进行分子鉴定，其中5个条带为纤毛菌特征条带。
图3 DGGE检测细菌多样性及目的条带测序鉴定
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