光合作用
植物叶绿体中,光合作用光反应电子链的最后一步中被还原为还原型辅酶Ⅱ(NADPH),此过程须经铁氧还蛋白-NADP+还原酶的催化。反应剩余一个质子(即氢离子),该质子与NADPH一起参加随后的碳反应(暗反应),并且将磷酸甘油酸(C3)还原成磷酸甘油醛(C5),这一过程也称为【碳的固定】。
呼吸作用
对于动物和其它非光合生物来说,磷酸戊糖途径的氧化相是细胞中NADPH的主要来源,由它可以产生大约60%所需NADPH。
但是,也有其他几个不太知名的机制能够产生出NADPH,但是所有这些机制都依赖于线粒体的存在。
在这些过程中的一些起到关键作用的酶分别有:NADP联苹果酸酶、辅酶联异柠檬酸脱氢酶、NADP联谷氨酸脱氢酶 以及 烟酰胺核苷酸转氢的异柠檬酸脱氢酶。
能够产生NADPH的这几个不太出名的机制中,有一部分的NADPH的来源疑似是脂肪,但是也不排除其主要来源是肝细胞的可能性。此外,在线粒体中,NADH激酶(NADH即为 辅酶I的简称)产生的NADPH和ADP,使用NADH和ATP作为底物。