蛋白质复性冷冻结晶脱盐的介绍

　　冷冻结晶脱盐在蛋白质复性研究方面的一些提示（集中精力在和缓的降低变性盐浓度上，之前的所有方法基本都是用稀释液体去增大体积，这个方法是让变性盐脱离溶液……）。

　　通常意义上人们普遍认为冷冻是一种变性因素，原因是在溶液的冻结过程中会伴随发生物态的巨大变化，进而导致蛋白质分子表面的离子氛围、pH、水化状态等各种因素的改变，因此变性也就是自然而然的结果。不过从事生物领域的多半都有冻存细胞的经历，由此可以得出结论，在合适的防冻剂存在的条件下，蛋白是可以耐受低温的。或者至少能有相当的蛋白能在低温下保持活性。况且在变性液体中也不存在有活性的蛋白质，本身都是以自由肽链的形式存在，因此冷冻对肽链的损伤似乎可以不用考虑（对此还需要进一步的研究）。

　　换个角度从物理学方面看，“冰”是一种单矿岩，其生成过程中会自动排除其中的杂质。这也就是为何海上的冰山都是淡水的缘故。通常人们用于溶解包涵体肽链的液体是高浓度的变性盐（一般是8M的尿素，或者6M的盐酸胍，两种盐的密度都在1.3左右），而这种溶质的溶解度受温度影响很大。随着温度的降低，会发生饱和、过饱和、结晶析出现象。溶质结晶析出自然也就意味着溶液浓度的下降，进而使变性能力的下降。下降到一定程度时，肽链其内在的塌缩的趋势逐渐占据优势，引导肽链进行自行复性至其活性状态，即能级最低状态。也就是说，肽链折叠的动力是由肽链的一级结构（氨基酸序列）决定的，人类直到所能做的复性过程其实质不过就是提供了一个变性能力和缓下降的变性体系（由尿素或者盐酸胍的浓度下降来实现）。在这个过程中最需要防止的就是肽链之间的错误折叠（链间形成次级键），这会产生“雪崩样”的效果，导致大量多聚体沉淀（密度也是1.3左右）。