HIB为需氧菌，培养较困难，由于该菌氧化还原酶系统不完善，生长时需要“X”和“V”两种生长辅助因子。“X”因子存在于血红蛋白中，可耐高温。“V”因子存在血液中，耐热性较差。在血液中“V”因子处于被抑制状态，加热75～100℃，5～10min，抑制物被破坏后才被18～24小时，菌落微小，无色，透明似露珠，
48小时后形成灰白色较大的菌落、圆形、透明。如以HIB和金黄色葡萄球菌在同一巧克力琼脂平皿上培养，由于葡萄球菌能合成较多的“V”因子，并弥散到培养基里，可促进HIB的生长，故在葡萄球菌菌落周围生长的HIB的菌落较大，距离葡萄球菌菌落越远的HIB的菌落越小。此称为“卫星现象”。这一特点有助于对此菌的鉴定。
由于有些标本如痰，有大量杂菌生长，对HIB的分离培养影响较大，在巧克力琼脂平皿内加入该菌可耐受的抗生素（每毫升巧克力琼脂内加万古霉素50mg，杆菌肽30mg，氯林可霉素1mg）可提高本菌的分离率。
根据荚膜多糖抗原成分的不同，应用型特异性免疫血清作荚膜肿胀试验或其它血清学试验，可以将HIB分成6个（a、b、c、d、e、f）血清型。其中b型对婴幼儿的致病性最强，且最多见，f型次之。
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