甲氨蝶呤的检查方法

(R)-甲氨蝶呤照高效液相色谱法(通则0512)测定。

供试品溶液取本品,加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液取消旋甲氨蝶呤,加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含40g的溶液色谱条件用牛血清白蛋白键合硅胶为填充剂;以正丙醇-磷酸盐缓冲液(pH6.9)(取0.71%无水磷酸氢二钠溶液500ml,加0.69%磷酸二氢钠溶液600ml,摇匀,用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.9)(8:92)为流动相;检测波长为302nm;进样体积20pl系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,出峰顺序依次为(S)-甲氨蝶呤峰与(R)-甲氨蜾呤峰,其分离度应大于3.0。测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图限度供试品溶液色谱图中如有(R)-甲氨蝶呤峰,其峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%)。有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。

供试品溶液取本品,加流动相溶解并稀释制成每1mI中含1mg的溶液。对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置200ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液分别取甲氦蝶呤与叶酸,用流动相溶解并稀释制成每1ml中各约含0.1mg的混合溶液。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-7.0%枸橼酸溶液-2.0%无水磷酸氢二钠溶液(8.5:10:80)(用7.0%栒橼酸溶液或2.0%无水磷酸氢二钠溶液调节pH值至6.0)为流动相;检测波长为302nm;系统适用性溶液进样体积10μl,其他溶液进样体积50l系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,理论板数按甲氨蝶呤峰计算不低于1000,甲氨蝶呤峰与叶酸峰之间的分离度应大于8.0。测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,单个杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积(0.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的4倍(2.0%)。水分取本品,照水分测定法(通则0832第一法1)测定,含水分不得过12.0%。炽灼残渣取本品1.0g,依法检查(通则0841),遗留残渣不得过0.1%。重金属取本品0.50g,加25%硫酸镁的硫酸溶液(取硫酸镁25g,加1mol/L硫酸溶液100m使溶解)4ml,摇匀,置水浴上蒸发至干,于800℃缓缓炽灼至完全炭化,炽灼时间不超过2小时,放冷,依法检查(通则0821第二法),含重金属不得过百万分之五十。