鉴别
(1)照薄层色谱法(通则0502)试验。供试品溶液取本品细粉适量(约相当于青蒿素10mg)加二氯甲烷3ml,使溶解,滤过,取续滤液。对照品溶液(1)取青蒿素对照品适量,加无水乙醇溶解并稀释制成每1ml含3mg的溶液。对照品溶液(2)取哌喹对照品适量,加二氯甲烷溶解并稀释制成每1ml含18mg的溶液色谱条件采用硅胶GF24薄层板,以二氯甲烷正己烷二乙胺(5:5:1)为展开剂。测定法吸取上述三种溶液各5l,分别点于同一薄层板上(薄层板预饱和20分钟),展开后,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视;再喷以茴香醛甲醇溶液(取冰醋酸10m与浓硫酸5ml,缓缓加到55ml甲醇中,放冷,将此溶液加人含有0.5ml茴香醛的30ml甲醇中,摇匀,避光保存),在110℃加热3~5分钟使显色。结果判定紫外灯光(254mm)下检视,供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液(2)的主斑点一致;显色后,供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液(1)的主斑点一致。(2)在青蒿素与哌喹含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间致(3)取本品细粉适量(约相当于青嵩素60mg),加丙酮2ml,振摇使溶解,滤过,滤液置60℃水浴蒸干,在80℃千燥30分钟,照红外分光光度法(通则0402)测定。除在1574cm-处的一组小吸收峰外,本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集220图)一致(4)取本品细粉适量(约相当于哌喹100mg),加0.1mol/L盐酸溶液15ml,振摇使溶解,滤过,滤液置分液漏斗中,加lmol/L氢氧化钠溶液2ml,使析出白色沉淀,再加二氯甲烷15ml,振摇提取,静置分层,取二氯甲烷层用水洗涤2次,每次15ml,取二氯甲烷层,通过无水硫酸钠滤过,滤液置60℃水浴蒸干,在80℃干燥30分钟,照红外分光光度法(通则0402)测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集274图)致以上(1)、(2)两项可选做一项
检查
有关物质I照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取含量测定项下细粉适量(约相当于青蒿素100mg),加丙酮适量使溶解,滤过,残渣挥干丙酮,加80%乙腈溶解并稀释至10ml,摇匀。对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中用80%乙腈稀释至刻度,摇匀。杂质Ⅱ定位溶液取杂质Ⅱ对照品适量,加80%乙腈溶解并稀释制成每1ml中约含5μg的溶液。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mn150mm,5pm);以乙腈水(50:50)为流动相;检测波长为210nm;进样体积20l系统适用性要求青蒿素峰(保留时间约为10分钟)与杂质Ⅰ峰(相对保留时间约为0.8)之间的分离度应大于4.0。测定法精密量取供试品溶液、对照溶液与杂质Ⅱ定位溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的1.5倍。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,除杂质Ⅱ峰外杂质Ⅰ峰(相对保留时间约为0.8)的峰面积乘以校正因子0.027后不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍(0.2%),其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%),各杂质峰面积的和(杂质Ⅰ按校正后的峰面积计算)不得大于对照溶液主峰面积的5倍(5.0%),小于对照溶液主峰面积0.05倍的色谱峰忽略不计,有关物质Ⅱ照高效液相色谱法(通则0512)测定。避光操作供试品溶液取含量测定项下细粉适量,加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含哌喹1mg的溶液,滤过,取续滤液。对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置100m量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈0.1%三氯乙酸溶液-三乙胺(18:82:0.2,磷酸调节pH值至2.5)为流动相;检测波长为216nm;进样体积20pl系统适用性要求哌喹峰与相邻色谱峰之间的分离度应大于2.0。测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(1.0%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2.5倍(2.5%)。溶出度照溶出度与释放度测定法(通则0931第二法)测定青蒿素溶出条件以含0.5%十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠6.9g,氢氧化钠0.9g,十二烷基硫酸钠5g,加水800ml,超声30分钟,用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8,用水稀释至1000m)1000ml为溶出介质,转速为每分钟75转,依法操作,经45分钟时取样。供试品溶液取溶出液滤过,取续滤液。对照品溶液取青蒿素对照品适量,精密称定,加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1m中约含1.25mg的溶液,摇匀,精密量取5ml,置100ml量瓶中,用溶出介质稀释至刻度,摇匀。色谱条件与系统适用性要求见含量测定青蒿素项下测定法见含量测定青蒿素项下。计算每片的溶出量限度标示量的70%,应符合规定哌喹溶出条件以0.05mol/L盐酸溶液1000ml为溶出介质,转速为每分钟50转,依法操作,经30分钟时取样供试品溶液取溶出液10ml,滤过,精密量取续滤液2ml,置100ml量瓶中,用溶出介质稀释至刻度,摇匀。对照品溶液取哌喹对照品适量,精密称定,加溶出介质溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.75mg的溶液,摇匀,精密量取1ml,置100ml量瓶中,用溶出介质稀释至刻度,摇匀。测定法取供试品溶液与对照品溶液,照紫外-可见分光光度法(通则0401),在347nm的波长处分别测定吸光度,计算每片的溶出量。限度标示量的80%,应符合规定。其他应符合片剂项下有关的各项规定(通则0101)。
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