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克隆化酵母DNA的操作实验——质粒缺口修复

2019.4.08

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实验材料	酵母
实验步骤	1. 将目的基因亚克隆到YRp质粒，通过基因内的两个限制性位点在基因中创造一个缺口区，在缺口两侧留下≥100~250 bp 的同源区，凝胶电泳纯化质粒骨架大片段。 2. 用1~10 μg 缺口质粒DNA转化待拯救的含突变等位基因的酵母菌株，通过YRp质粒上的选择基因进行选择，应用质粒分离除去技术鉴定选择标志不稳定的转化子。 3. 在不稳定的转化子中，筛选那些仍然显示突变表型的转化子。 4. 从带突变表型的转化子中制备DNA转化大肠杆菌，分析小量制备的DNA。展

实验材料

实验步骤

1. 将目的基因亚克隆到YRp质粒，通过基因内的两个限制性位点在基因中创造一个缺口区，在缺口两侧留下≥100~250 bp 的同源区，凝胶电泳纯化质粒骨架大片段。

2. 用1~10 μg 缺口质粒DNA转化待拯救的含突变等位基因的酵母菌株，通过YRp质粒上的选择基因进行选择，应用质粒分离除去技术鉴定选择标志不稳定的转化子。

3. 在不稳定的转化子中，筛选那些仍然显示突变表型的转化子。

4. 从带突变表型的转化子中制备DNA转化大肠杆菌，分析小量制备的DNA。

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