根据鸡肉中加标(5ng/g)平行测试结果,优化流动相条件后,利巴韦林与杂质可完全分离,回收率为 109.9%和 109.8%,金刚烷胺回收率为 105.4%和 101.2%;据此,Cleanert PBA-2 订货号:PBA2603可满足同时检测利巴韦林和金刚烷胺的要求。
实 验
部分
样品处理
样本提取
准确称取两份搅碎鸡肉样品各 2g 置于 15mL 离心管中,其中一份加入 10µL 各含利巴韦林和金刚烷胺各 1ppm 的标液,4 µL 浓度为 1ppm 的金刚烷胺-D15 内标和 20µL 浓度为 1ppm 的利巴韦林-13C5 内标及 5mL 乙酸铵溶液(pH4.8),另一份加入 5mL 乙酸铵溶液(pH4.8)作为空白对照;再向上述两份离心管中各加入 10mg 酸性磷酸酶(0.5-3.0 unit/mg solid),涡旋 30s 后于 37°C 恒温避光酶解 2h;酶解液各加入 4mL 5%的三氯乙酸水溶液,涡旋 30s 后于冰箱冷藏 30min 后, 10000r/min 离心 10min;上清液用氨水调节 pH8.5±0.1,过 0.45µm RC 膜,用水定容至 10mL 待净化。
样品净化
固相萃取方法:
Cleanert PBA-2 订货号:PBA2603
净化过程:
活化:3mL 乙腈,1mL 100mM 甲酸水溶液,3mL pH8.5 乙酸铵上样:5mL 待净化液
淋洗 1:3mL pH8.5 乙酸铵,3mL 水,抽干
洗脱 1:2mL 100mM 甲酸水溶液,抽干,过 0.22µm Nylon 膜待测淋洗 2:3mL 甲醇,抽干
洗脱 2:3mL 5%氨化甲醇(含 25%异丙醇)收集,氮吹近干 2mL 含 5%甲醇的水溶液复溶,过 0.22µm Nylon 膜待测
注:neat-std(用洗脱液稀释的含利巴韦林和金刚烷胺(含内标,金刚烷胺-D15 1ppb,利巴韦林-13C5 5ppb)的标准溶液,各 2.5ppb)spkied pre-ext(加标后过 SPE 柱)
spiked post-ext(空白对照的洗脱收集液加标)
实 验
部分
利巴韦林检测方法
液相条件
色谱柱:Venusil MP C18(2),2.1×150mm,3µm,110 Å
流动相:A 相:B 相=0.1%FA 水溶液:乙腈
质谱条件
离子源:电喷雾离子源;
扫描方式:正离子模式;
电喷雾电压:5000V;
气帘气压力 15psi ;
辅助气压力:40psi;
雾化器气压:40psi;
离子源温度:400 ℃;
采集方式:多反应监测 ( MRM);
质谱参数见表 2。
液相条件
色谱柱:Venusil MP C18(2),2.1×150mm,3µm,110 Å
流动相:A 相:B 相=0.1%FA 水溶液:乙腈