前言
烟酸和烟酰胺统称为维生素B3，是人体必需的维生素之一，在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。烟酸和烟酰胺有同样的生理功能，烟酸在人体内转化为烟酰胺，烟酰胺是辅酶Ⅰ和辅酶Ⅱ的组成部分，而辅酶Ⅰ和辅酶Ⅱ是许多脱氢酶的辅酶，它与糖酵解、脂肪代谢、丙酮酸代谢等有密切关系，并在维持皮肤和消化器官正常功能中起着重要作用。烟酸和烟酰胺是婴幼儿配方米粉和乳粉中重要的营养成分，它与蛋白质的代谢及儿童智力发育关系密切，对婴幼儿成长发育起着重要的作用。
目前，食品中烟酸和烟酰胺的检测方法主要有超临界流体色谱法、离子色谱法、液相色谱法、液相色谱串联质谱法和微生物法等。液相色谱法由于具有灵敏度高、定量准确等优点，成为应用较为广泛的检测方法。本文根据国家标准GB 5413.15-2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定》中提供的方法进行分析测定，供相关人员参考。
LC-5520液相色谱仪
PART ONE
实验部分
实验原理
试样经热水提取、酸性沉淀蛋白质后，以C18色谱柱分离，用紫外检测器定量。
仪器设备与试剂
LC-5520 液相色谱仪（紫外检测器）；
AS-405 自动进样器；
DM-101 在线脱气机；
淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg；
盐酸（分析纯）；
氢氧化钠（分析纯）；
高氯酸（HClO4）；
甲醇（CH4O）：色谱纯；
异丙醇(C3H8O)：色谱纯；
庚烷磺酸钠(C7H15NaO3S)：优级纯。
实验条件
色谱柱：C18 柱（粒径 5 μm，150 mm ×4.6 mm）；
流动相：甲醇：异丙醇：庚烷磺酸钠溶液=20：70：910；
流速：1.0 mL/min；
检测波长：261 nm；
柱温：25 ℃；
进样量：20 μL。
样品处理
含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约 5.0 g（精确到 0.0001 g）加入约 25 mL 45℃-50 ℃的水，或称取混合均匀液体试样约20.0 g（精确到 0.0001 g）于 150 mL 锥形瓶中，再加入约 0.5 g 淀粉酶，摇匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置于 50 ℃-6 0 ℃的培养箱内培养约 30 min，取出冷却至室温。
不含淀粉的试样：称取混合均匀固体试样约 5.0 g（精确到 0.0001 g）加入约 25 mL 45 ℃-50 ℃的水，或称取混合均匀液体试样约 20.0 g（精确到 0.0001 g）于 150 mL 锥形瓶中，振摇，静置5min-10 min，充分溶解，并冷却至室温。
提取：将上述锥形瓶置于超声波振荡器中振荡约 10 min。
沉淀及定容：待试样溶液降至室温后，用盐酸调节试样溶液的 pH 值至 1.7 ±0.1，放置约 2 min 后，再用氢氧化钠溶液调节试样溶液的 pH 值至 4.5 ±0.1。将试样溶液转至 50 mL 容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于 50 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后经滤纸过滤，滤液再经 0.45μm 微孔滤膜加压过滤，用试管收集，即为试样待测液。
PART TWO
实验结果
标准谱图
图1.烟酸和烟酰胺标准品谱图
图2.烟酸标准曲线
图3.烟酰胺标准曲线
样品检测
取 5.0085g 某品牌婴幼儿1段奶粉样品进行处理测定，下图为样品谱图。图谱中样品峰为烟酸，未检出烟酰胺。
图4.样品谱图
样品结果
PART THREE
实验总结
本文根据国家标准GB5413.15-2010《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中烟酸和烟酰胺的测定》用LC-5520 高效液相色谱分析婴幼儿奶粉中烟酸和烟酰胺的含量，线性范围良好，线性相关系数均≥0.999，峰形较好，重复性较好。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值未超过算术平均值的 10%，符合国标的要求。
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