前言
牛初乳通常是指奶牛分娩后7d特别是3d 内所分泌的乳汁。目前，牛初乳作为一种功能性食品的原料已经受到普遍关注，它的特殊性首先体现在其化学组成及活性物质的含量上。牛初乳免疫球蛋白（Ig）总量约为 50~100 mg/mL，其中80% 以上是IgG。免疫系统发育不健全的新生牛犊吸收的IgG以未消化的状态直接通过肠壁进入血液而获得被动免疫，这种被动免疫可保护犊牛免受外来疾病的侵袭。
目前，国内外测定IgG的方法有酶联免疫吸附法、琼脂单、双向扩散法、放射免疫法、高效液相色谱法等。其中高效液相色谱法具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高等优点，本文根据国家标准GB/T 5009.194-2003《保健食品中免疫球蛋白IgG的测定》，建立了利用高效液相色谱LC-5520测定牛初乳粉中免疫球蛋白IgG的方法，供相关乳制品企业质量控制部门人员参考。
LC-5520液相色谱仪
PART ONE
实验部分
实验原理
根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接，在pH 2.5 的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。
仪器设备与试剂
LC-5520 液相色谱仪（紫外检测器）；
AS-405 自动进样器；
DM-101 在线脱气机；
磷酸氢二钠；
磷酸二氢钠甘氨酸；
盐酸 IgG标准品。
实验条件
色谱柱：Pharmacia HI-Trap Protein G 柱，1 mL；
流动相A：pH 6.5，0.05 mol/L 磷酸盐缓冲液；
流动相B：pH 2.5，0.05 mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液；
流 速：0.4 mL/min；
检测波长：280 nm；
进样量：20 μL。
样品处理
称取 0.1 g（精确至 0.001 g）试样，用流动相A稀释至25.0 mL，摇匀，通过0.45 μm微孔滤膜后进样。
PART TWO
实验结果
标准曲线
将IgG标准系列依次按上述色谱条件上机测定，记录色谱峰的峰高。以峰高为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线如图1所示。线性方程及相关系数如表1所示。
图1 IgG标准曲线
样品分析
将试样待测液进行色谱测定如图2所示。记录色谱峰峰高，根据标准曲线计算出试样待测液中IgG的浓度。
图2 奶粉IgG图谱
根据标准曲线计算结果：某品牌牛初乳 IgG含量为：1.08mg/mL 。
PART THREE
实验总结
本文建立了一种利用LC-5520高效液相色谱仪测定牛初乳中IgG的含量的方法，采用0.05 mol/L 磷酸盐缓冲液和0.05 mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液为流动相，对IgG进行含量测定。实验证明，线性关系良好，相关系数r≥0.999。该方法简便快速，重现性好，灵敏度高，可以满足乳制品企业牛初乳中IgG质量控制中。
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