在实验室进行样品纯化分离的时候，我们经常会发现Flash柱层析往往不能重现TLC的分离情况，即使已经通过TLC对各个组分有了非常正常的极性判断；也就是说，在TLC薄层板上分离情况很好，而转换到Flash柱层析之后，目标化合物却没有得到比较有效的分离，这是为什么呢？
此次，我们将就此问题做一些尝试和探讨。
对于色谱分离来说，往往流动相的极性以及其选择性能决定分离效果的好坏，如果您某次的纯化效果不理想，我们的建议是，您可以对流动相的极性以及选择性进行调整，那么如何优化流动相的选择性呢？
举例说明：如果在您所建立的方法中，其中的一个极性流动相是甲醇，那么即使此方法在TLC点板中可以得到分离，也有可能会因为甲醇的质子性太强而导致Flash纯化不尽如人意。产生这一现象的原因在于：在TLC中，极性溶剂比非极性溶剂更容易被保留。而对于Flash柱层析来说，这个现象依然会存在，但是由于在进行柱层析之前，都需要进行柱平衡（即我们所知的前期润柱过程），色谱柱已经被充满了流动相，使得样品在柱层析和TLC当中移动的主要推动力会产生差异，同时甲醇的质子性效应也会在柱层析的过程中被放大，导致最终Flash的实际分离情况和TLC并不相同；另一方面，薄层TLC的硅胶粒径和Flash柱层析的硅胶粒径也存在一些差异，也会导致重现分离情况会出现一些差异。
那么如果是这种原因，我们是否直接省去前期的柱平衡过程呢？我们并不推荐这么做，如果不进行前期的柱平衡，在纯化过程中会产生更多的问题，如：溶剂被加热，样品保留被破坏，从而影响分离度。或者可以寻找另外一种溶剂来代替甲醇。
而在大部分情况下，乙腈是可以作为甲醇的一种代替溶剂来进行使用的，同时乙腈的极性和甲醇相似，而且不是质子性溶剂，或许它在TLC方法中会更容易转移到Flash柱层析当中。
为了去证实此种设想，我们进行了相关实验尝试，将实际样品在乙腈和甲醇之间做了TLC对比，样品为三种化合物(对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸甲酯和4-甲基-4(5)-硝基咪唑)的混合物。
Figure 1. 样品在甲醇和乙腈条件下的TLC点板信息。
左边为二氯甲烷-甲醇体系，右边为二氯甲烷-乙腈体系；两种体系都在TLC上面都得到了比较好的分离。
在此基础上，我们用以上两种不同的流动相体系进行了Flash柱层析分离，如Figure2：
Figure 2. 二氯甲烷-甲醇体系和二氯甲烷-乙腈体系Flash分离谱图对比，上为甲醇体系，下为乙腈体系。
显而易见，乙腈更换可以使得分离度大大提高。
因此在实际应用中，当Flash柱层析无法重现TLC点板信息时，可以尝试着更换流动相的极性溶剂来改变选择性和分离度。
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