在第一期的实验小课堂里，我们与大家分享了有关灵敏度下降的处理方法（
液相色谱峰不正常的来源很多种，但只要学会分类并逐一排查，就能找到合适的解决方法。我们建议大家遇到问题时沉着冷静，仔细观察色谱图确认问题，再根据不同分类进行后续处理。
常见的色谱峰问题主要有以下三类：
1. 色谱峰峰形异常
例如：负峰，宽峰，肩峰，双峰，峰形不对称等。
2. 色谱图中峰个数异常
例如：色谱图未出峰，出峰超预想范围。
3. 色谱峰保留时间异常
例如：保留时间漂移，保留时间增加或减少。
了解大致分类后，我们下面就各个问题进行逐一分析及经验分享。
1
色谱峰峰形异常
现象：峰拖尾/峰后面有鼓包
可能原因：
柱后有死体积
色谱柱问题（如填料塌陷）
现象：峰展宽且拖尾
可能原因：
色谱柱入口筛板部分阻塞
在线过滤器污染
保护柱污染
现象：峰展宽
可能原因：
管路内径/过长的管线
体积过载
质量过载
现象：所有色谱峰都变形
可能原因：
溶解样品的溶剂不当
现象：峰前沿或峰分叉
可能原因：
溶剂问题
进样量太大
色谱柱前面接头有死体积
色谱柱或保护柱问题
化合物的性质
溶剂问题
现象：碱性物质峰拖尾
可能原因：
色谱柱上残留硅醇羟基
pH影响
现象：所有色谱峰均为负峰
可能原因：
光学检测器尚未达到平衡
信号电缆接反
检测器输出极性设置颠倒
现象：一个或几个色谱峰为负峰
可能原因：
流动相吸收本底高
进样过程进了空气
离子对分离中的系统峰
样品组分的吸收低于流动相
现象：所有色谱峰均为宽峰
可能原因：
系统未平衡或未达到化学平衡
接头未接好产生了死体积
溶样的溶剂比流动相强很多
色谱柱类型或尺寸不正确
色谱柱或保护柱被污染或降级
温度变化对色谱柱的影响
现象：较早洗脱的峰呈宽峰
可能原因：
进样体积过大或样品浓度太高
进样器有问题,定量环（Loop）大小不合适
在线过滤器、保护柱、色谱柱或管路堵塞
管路问题：内径不对或切管不正确
管路连接问题：接头或锥箍不正确
检测器时间常数不正确
2
色谱峰个数异常
现象：色谱图未出峰
可能原因：
进样问题 – 未进样或样品分解
流动相问题 – 泵未输液或流动相不正确
检测器 – 设置不正确
现象：出峰比预想的少
可能原因：
样品分解
色谱柱柱效丧失
用错流动相
梯度洗脱平衡时间不足
现象：出峰比预想的多
可能原因：
样品分解或制样时导入了杂质
流动相被污染，或用错流动相
流动相中含有稳定剂或稳定剂发生变化
前次进样的后流出物（某些tR值特别大的组分）
进样器被污染，洗针系统出问题或注射器脏
保护柱脏，色谱柱被污染，分辨率下降
3
色谱峰保留时间问题
现象：保留时间漂移
可能原因：
系统不稳定或未达化学平衡
泵压力不稳（泵头里有气泡）
进样体积过大或样品浓度过大
温度波动
流动相混合不均匀
色谱柱被污染
系统渗漏
现象：保留时间改变到一个新的恒定值
可能原因：
流动相不正确或其组成不正确
泵流速变化
实际输液的流速不正确（泵失灵或故障）
环境温度变化，柱温不正确
色谱柱尺寸或类型不正确
色谱柱被污染
流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化
输液系统的梯度滞后体积不正确
面对液相色谱峰的问题，建议各位先进行问题归类，再对应采取不同的解决办法。以上的汇总希望能给到大家一些新的思路和见解，以后再遇到类似问题就能不慌不乱了。
相关阅读：
常见HPLC峰拖尾原因及解决方法
色谱峰保留时间变化常见原因和解决方法
液质联用常见故障之【灵敏度下降】
手把手教你读懂LC仪器常见故障（上）
手把手教你读懂LC仪器常见故障（下）
首页
