高效液相色谱法测人参中三种有效成分

本品为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey. 的干燥根和根茎。多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称“园参”，播种在山林野生状态下自然生长的称“林下山参”，习称“籽海”。

1 方法原理    

人参有效成分为人参皂苷Rg1，人参皂苷Re和人参皂苷Rb1，其在203nm处有较强的紫外吸收。处理后的样品通过色谱柱后各组分得到分离，用紫外检测器检测，用保留时间定性，峰面积外标法定量，理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000。

2 主要仪器设备和试剂

仪器：LC220高效液相色谱仪，上海仪电分析仪器有限公司；

           万分之一天平；

           超声波水浴；

           索式提取器；

             实验室常用玻璃仪器。

试剂：甲醇、乙腈（色谱纯）；

           三氯甲烷。

3 实验方法

3.1 对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，摇匀，即得。

3.2 供试品溶液的制备

取本品粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移人100ml 锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.3 高效液相色谱仪参考条件

色谱柱：C18或分离效果相当的色谱柱，4.6×250mm；柱温：30℃；

流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B；检测波长：203 nm；

梯度：（阴影部分为药典梯度后加上的回复初始条件的梯度）

4 实验结果

4.1 对照品高效液相色谱图

人参对照品高效液相色谱图

4.2 供试品高效液相色谱图

人参供试品高效液相色谱图

4.3 重复性

对照品连续五针RSD分别为0.53%、0.32%、0.41%；

供试品两个平行样相对平局偏差为1.02%、0.95%。

以普通C18色谱柱做人参时的改良方案

以普通C18色谱柱做人参供试品时，因样品中复杂的残留按常规梯度无法冲洗出来，会引起后续试验过程中冲洗出大量残留的情况，所以需要在实验结束后加一个高有机相流动相的清洗梯度：

如下图所示，连续两针后面一针不再受到残留杂质出峰的干扰：