临床质谱检测项目：LC-MS/MS助力嗜铬细胞瘤精准诊断

沃特世

2019.12.05

作者沃特世

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儿茶酚胺（包括肾上腺素E、去甲肾上腺素NE和多巴胺DA）及其代谢物（变肾上腺素MN、去甲变肾上腺素NMN和3-甲氧基酪胺3-MT）是肾上腺髓质分泌的神经内分泌激素，可以引起人或动物血压升高、心跳加快、血管紧张、代谢率提高、耗氧量增加等，在血浆中的浓度变化与许多病理过程息息相关，含量超标会引发高血压与心肌梗塞，含量过低会导致低血压。

由于儿茶酚胺可引起肾素、胰岛素和胰高血糖素、甲状腺激素、降钙素等多种激素分泌的变化，临床上可以用于辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤等内分泌相关的疾病，特别是嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤如果不能及时治疗，心血管疾病的发病率和死亡率很高。但是儿茶酚胺及其代谢物的极性较大、结构相近，而且在血浆中含量较低、干扰较大，传统的免疫法不能准确定量，必须采用先进的样品前处理方法和灵敏度更高、选择性更好的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法进行定量分析。

图1. 儿茶酚胺及其代谢物在人体内的代谢途径。

北京协和医院内分泌科从九十年代开始就已经建立了液相色谱电化学联用法对尿液儿茶酚胺进行临床检测，为临床嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的诊断和治疗提供了巨大的帮助。一般尿液检测需要收集24H尿液，比较耗时，而血液中儿茶酚胺及其代谢物的浓度比较稳定，但是比尿液浓度低几百倍，对检测灵敏度的要求更高，检测难度更大。所以北京协和医院检验科与沃特世公司临床应用工程师合作开发了LC-MS/MS法同时检测血浆样品中儿茶酚胺及其代谢物的定量。并在Journal of Chromatography B 上发表了文章，进一步帮助嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤的快速诊断和鉴别诊断。

该方法不仅可以准确定量低浓度的血液样本中儿茶酚胺及其代谢物的浓度，也可以同时检测尿液样本，并且快速、简便、灵敏度高。前处理是采用Oasis WCX μElution 96孔固相萃取柱快速净化富集血浆中E、NE、DA、MN、NMN和3-MT，HSS PFP色谱柱分离，采用沃特世UPLC I-Class Xevo TQ-S IVD超高灵敏度的三重四极杆质谱进行定量分析，色谱分离如下图2。

图2. 左边是血浆样品经Oasis WCX μElution SPE纯化富集后MN、NMN、E、NE、3-MT和DA检测的色谱图，右边其对应的内标色谱图。

该方法样品前处理操作简便、快速，96个样品的前处理只需要1小时，每个样品色谱分离时间仅4分钟，每天可以完成200例以上的样本分析。本方案对儿茶酚胺及其代谢物的检测灵敏度较高，检测的标准曲线见图3，可以覆盖临床检测所需要的定量范围，6个化合物的加标回收率在90%～110%之间，批内和批间精密度均<10%。